（一）馬來酰亞胺類

    巰基作為備選的交聯(lián)基團具有以下優(yōu)點：交聯(lián)位點確定，交聯(lián)反應(yīng)可逆，可以實現(xiàn)順序交聯(lián)反應(yīng)。馬來酰亞胺可在 pH6.5--7.5的條件下與巰基發(fā)生特異性反應(yīng)形成穩(wěn)定的巰醚鍵。中性 pH值條件下，馬來酰亞胺與巰基反應(yīng)的速率快于氨基000倍。但是pH大于8.5時，反應(yīng)更傾向于氨基。馬來酰亞胺不與、和發(fā)生反應(yīng)。馬來酰亞胺在溶液中也會發(fā)生水解反應(yīng)，尤其是在pH值大于8.0的條件下。水解反應(yīng)會與巰基交聯(lián)反應(yīng)發(fā)生競爭。反應(yīng)溶液中應(yīng)該避免自由巰基的存在。同樣，巰基化合物也可用于馬來酰亞胺交聯(lián)反應(yīng)的終止。反應(yīng)緩沖體系中添加 EDTA可以避免巰基的氧化。ELISA試劑盒

（二）鹵乙酰基類

    zui為常用的α-鹵乙酰基類交聯(lián)劑含有可以在生理pH值條件下與巰基反應(yīng)的鹵乙?；鶊F。為保證巰基反應(yīng)的特異性，通常選擇pH8.5條件，并且鹵乙?；宦?lián)劑輕微過量。鹵乙?；宦?lián)劑大量過量會與其他氨基酸發(fā)生非特異性反應(yīng)。咪唑可以與鹵乙?；愒趐H6.9耀7.0條件下發(fā)生反應(yīng)，但是反應(yīng)孵育時間必須超過一周。ELISA試劑盒

    為抑制游離碘的生成，鹵乙?；宦?lián)反應(yīng)應(yīng)該閉光進(jìn)行，因為游離鹵素可以與、和殘基發(fā)生反應(yīng)。常用的NHS酯鹵乙?；p官能團交聯(lián)劑包括SIA、SIAB和硫化SIAB等。

（三）二硫代聯(lián)吡啶

    二硫代聯(lián)吡啶可與巰基在較寬pH值范圍內(nèi)發(fā)生反應(yīng)形成二硫鍵，pH值為4--5。由于反應(yīng)后產(chǎn)生2-硫吡啶，因此可以通過檢測其在343nm的吸光度值判斷反應(yīng)進(jìn)行的程度。常用的二硫代聯(lián)吡啶類交聯(lián)劑包括LC-SPDP、硫化LC-SPDP和PDPH。

（四）酰肼類

    羰基化合物（醛酮類）可與酰肼和氨基在pH5耀7的條件下反應(yīng)，與酰肼的反應(yīng)速度快于氨基。此類交聯(lián)劑可以用于位點特異性的交聯(lián)反應(yīng)。蛋白質(zhì)分子中所含有的羰基并不是十分穩(wěn)定，但是多糖鏈經(jīng)高碘酸鈉輕度氧化后會經(jīng)鄰近的羥基氧化成為醛基或酮基。通常此類氧化反應(yīng)都是在閉光0--4℃條件下進(jìn)行的，以此避免副反應(yīng)的發(fā)生。隨后添加酰肼就可以形成腙鍵。此種交聯(lián)反應(yīng)主要用于抗體的修飾方面，因為抗體的Fc段通常含有碳水化合物。0℃，mmol/L高碘酸鈉條件下，氧化反應(yīng)于唾液酸殘基。如果濃度提高到6耀0mmol/L水平，那么蛋白分子中的其他碳水化合物也可以參與反應(yīng)。

（五）碳二亞酰胺類

    碳二亞酰胺可以介導(dǎo)羧基與氨基或酰肼的反應(yīng)，生成酰胺鍵或腙鍵。由于蛋白的末端及側(cè)鏈通常都含有羧基和氨基，所以使用此類交聯(lián)劑會造成蛋白多聚體的形成。所形成的共價鍵類似于蛋白分子的肽鍵，所以是十分穩(wěn)定的，如果不破壞蛋白是不可能打開形成的交聯(lián)鍵的。ELISA試劑盒

    EDC〔-乙基-3-（3-二甲基氨丙基） -碳二亞胺〕是此類交聯(lián)劑中使用的一種，在半抗原的合成和酶的修飾中使用較多。其機制一般認(rèn)為是蛋白殘基的羧基先同EDC反應(yīng)，生成活潑的中間產(chǎn)物O-?；愲澹∣-acylisourea），這個中間產(chǎn)物再與親核基團，如氨基或羥基，發(fā)生反應(yīng)。