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原代細(xì)胞
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RNA/DNA提取
血清
ATCC細(xì)胞
質(zhì)粒
細(xì)胞系

學(xué)習(xí)elisa試劑盒的判定方法和檢測說明

時間:2016/7/15閱讀:1002
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   elisa試劑盒判定結(jié)果方法
  .定量測定結(jié)果按照尺度曲線計較樣品中待測物的含量。
  2.目測定性法:參加底物經(jīng)酶解和終止反響后,肉眼察看陽性孔顏色明顯深于(競爭法例淺于)陰性比較;與陰性比較的顏色靠近者,斷定為陰性。
  3.以樣品孔的OD值大于陰性比較OD值+2~3SD,作為陽性結(jié)果的閾值。
  4.以P/N值(陽性孔OD值/陰性孔OD值)大于或即是2.為陽性;P/N值小于2.,但大于.5為可疑;P/N小于.5為陰性。
  elisa試劑盒檢測說明
  、試劑
  ()5%與2.5%PEG用0.02mol/LpH7.4PBS配制;
  (2)牛血清白蛋白(BSA)緩沖液:用0.05mol/LpH7.4PBS配制。含0.0mol/LEDTA、0.%硫柳汞、0.05%Tween20及4%BSA;
  (3)HRP-SPA用改良過碘酸鈉法將SPA與辣根過氧化物酶(HRP)制成結(jié)合物,zui適工作濃度以方陣法滴定;
  (4)熱聚合人IgG:人IgG0mg/ml,63℃加熱20min制成。
  2、把持步伐
  ()用PBS稀釋SPA成5Ps/ml,包被聚苯乙烯反應(yīng)板微孔,每孔0.ml( 比力孔不包被),置4℃ 過夜后洗滌3次備用;
  (2)待測血清0.05ml加PBS0.5ml和5%PEG0.2ml混勻,4℃ 過夜后600r/min離心20min,棄上清,沉淀用2.5%PEG洗2次,加入PBS0.2ml和BSA緩沖液0.2ml,混勻,置37℃水浴30min,擺蕩,使*溶解;
  (3)將已溶解的待測血清沉淀物加至上述包被孔和比力孔中,置37℃60min,洗3次;各孔加底物溶液(OPD—H202)0.ml,37℃20min使呈色。每孔加2mol/LH2S04滴終止反應(yīng)。置酶標(biāo)儀492nm測各孔吸光值;
  (4) 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備:取正常人血清0.2ml,加熱聚合人IsC(20ug/ml)0.2ml,再加PBS0.4ml和5%PEG0.8ml,置4℃ 過夜。同時做不加熱聚合人耽的正常血清比力,以排除血清中干擾因素。沉淀清洗同標(biāo)本把持。用稀釋的BSA緩沖液(加等量0.0mol/LpH7.4PBS).6ml溶解并稀釋成20、60、30、5、7.5ug/ml,與待測血清同法把持,制成工作標(biāo)準(zhǔn)曲線;
  (5)結(jié)果判斷:從待測血清吸光度值查標(biāo)準(zhǔn)曲線,即可換算成相當(dāng)于熱聚合人IgG的CIC含量(ug/ml)。以高于正常比力X+2S,即大于28.4ug/ml為陽性。
  3、注意事項(xiàng)
  ()熱聚合人IgC應(yīng)分裝貯存于-20℃,不宜反復(fù)凍融,否則易解聚;
  (2)PEG的濃度影響CIC沉淀量,須嚴(yán)格配制。

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