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elisa實驗常見問題處理方法

時間：2016/11/1閱讀：923

elisa實驗常見問題處理方法

elisa試驗以靈敏度較高、特異性較好的特點在科研上得到了廣泛的應用，但操作中的各個環(huán)節(jié)對試驗的檢測效果影響較大，如不注意，有可能導致顯色不全、花板等結果。
下面將操作中各個環(huán)節(jié)常出現(xiàn)問題解決辦法總結于下：
選擇試劑：

選擇質(zhì)量優(yōu)良的檢測試劑，嚴格按照試劑說明書進行操作，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鐘。
標本收集與保存：
避免使用肉眼可見的溶血標本、高脂標本和混濁標本；2-8℃下，標本可放置24-48小時，保存需放置-20℃下。
請避免反復凍融。
具體請參照：
試劑使用中的準備工作及注意事項：
試劑盒中會有提示，一般需要準備的有：
洗滌液；用前配制；有的試劑盒會標明，配好的4度下一般可以放一個月；如果沒有標明，盡量用新鮮的，不要多配制。
顯色液（有A液和B液的），用前5分鐘配制；
標準品：有的試劑盒中標準品是已經(jīng)配制好的，4度保存；有的是要現(xiàn)配制的；按照說明書操作；
濃縮結合的二抗和HRP：如果需要配制，試劑盒沒注明配好可以保存多久的話，盡量現(xiàn)配現(xiàn)用（用前5分鐘配制）；
原則是：試劑盒上沒有指出配制物的儲藏方式的話，應該現(xiàn)配現(xiàn)用；不要怕麻煩；還有小瓶的管子開蓋前要離心，以免蓋子上粘連以后總量不夠。
加樣：室溫溫育的試劑，特別是溫育時間比較短的實驗操作的試劑，加樣對數(shù)據(jù)的影響比較大，特別要注意加樣問題。
不好的操作原因：
不會正確使用加樣器；
血清或血漿標本分離不好即進行加樣；
手工操作中，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內(nèi)溫度較高時)；
加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外。

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