小液流法測定植物組織水勢技術(shù)分析

一、 原理

TSZ Elisa試劑盒將植物組織分別放在一系列濃度遞增的溶液中，當(dāng)找到某一濃度的溶液與植物組織之間水分保持動態(tài)平衡時，則可認(rèn)為此植物組織的水勢等于該溶液的水勢。因溶液的濃度是已知的，可以根據(jù)公式算出其滲透壓，取其負(fù)值，為溶液的滲透勢(ψπ)，即代表植物的水勢(ψw)(waterpotential)。

ψw=ψπ=-P=-CRT(大氣壓)

二、材料、儀器設(shè)備及試劑

(一)材料：小白菜、菠菜、油菜或其它作物葉片

(二)儀器設(shè)備：.帶塞小瓶2個;2.帶有橡皮管的注射針頭;3.鑷子;4.打孔器5.培養(yǎng)皿。

(三)試劑：.0.05、0.0、0.5、0.20、0.25、0.30mol/L蔗糖溶液;2.甲烯藍(lán)粉末。

三、實驗步驟

(一)取干燥潔凈的瓶6個為甲組，各瓶中分別加入0.05～0.30mol/L蔗糖溶液約4ml(約為瓶的2/3處)，另取6個干燥潔凈的瓶為乙組，各瓶中分別加入0.05～0.30mol/L蔗糖溶液ml和微量甲烯藍(lán)粉末著色，上述各瓶加標(biāo)簽注明濃度。

(二)取待測樣品的功能葉數(shù)片，TSZ Elisa試劑盒用打孔器打取小圓片約50片，放至培養(yǎng)皿中，混合均勻。用鑷子分別夾入5～8個小圓片到盛有不同濃度的甲烯藍(lán)蔗糖溶液的瓶中(乙組)。蓋上瓶塞，并使葉圓片全部浸沒于溶液中。放置約30～60min，為加速水分平衡，應(yīng)經(jīng)常搖動小瓶。

(三)經(jīng)一定時間后，用注射針頭吸取乙組各瓶藍(lán)色糖液少許，將針頭插入對應(yīng)濃度甲組瓶溶液中部，小心地放出少量液流，觀察藍(lán)色液流的升降動向。(每次測定均要用待測濃度的甲烯藍(lán)蔗糖溶液清洗幾次注射針頭)。如此方法檢查各瓶中液流的升降動向。若液流上升，說明浸過小圓片的蔗糖溶液濃度變小(即植物組織失水);表明葉片組織的水勢高于該濃度糖溶液的滲透勢;如果藍(lán)色液流下降則說明葉片組織的水勢低于該糖溶液的滲透勢，若藍(lán)色液流靜止不動，則說明葉片組織的水勢等于該糖溶液的滲透勢，此糖溶液的濃度即為葉片組織的等滲濃度

四、結(jié)果計算

將求得的等滲濃度值代入如下公式：

ψw=ψπ=-CRTi×.03×0.。式中：ψw=植物組織的水勢(單位：Mpa)ψπ=溶液的滲透勢C=等滲濃度(mol/L)R=氣體常數(shù)(0.00834MPa/L/mol/K)T=溫度i=解離系數(shù)(蔗糖=，CaCl2=2.60)大氣壓=.03=0.MPa。

【注意事項】

.TSZ Elisa試劑盒所取材料在植株上的部位要一致，打取葉圓片要避開主脈和傷口。

2.2取材以及打取葉圓片的過程操作要迅速，以免失水。

3.3帶有結(jié)晶水的甲烯藍(lán)不易溶于CaCl2溶液，可在00℃下烘干成無水甲烯藍(lán)粉末使用。