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TSZ Elisa試劑盒模式及具體的實(shí)驗(yàn)條

時(shí)間:2018/5/22閱讀:1086
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TSZ Elisa試劑盒封閉是否必要,取決于ELISA的模式及具體的實(shí)驗(yàn)條件。并非所有的ELISA固相均需封閉,封閉不當(dāng)反而會(huì)使陰性本底增高。一般說(shuō)來(lái),雙抗體夾心法,只要酶標(biāo)記物是高活性的,操作時(shí)洗滌*,不經(jīng)封閉也可得到滿意的結(jié)果。特別是用單抗腹水直接包被時(shí),因其中大量非抗體蛋白在包被時(shí)同樣也吸附在固相表面,業(yè)已起到了類似封閉劑的作用。但在間接法測(cè)定中,封閉一般是不可少的(見(jiàn)2.2.2)。包被好的ELISA板干燥后放入密封袋或錫袋中,在低溫可保存數(shù)月。

 封閉(blocking)是繼包被之后用高濃度的無(wú)關(guān)蛋白質(zhì)溶液再包被的過(guò)程。抗原或抗體包被時(shí)所用的濃度較低,吸收后固相載體表面尚有未被占據(jù)的空隙,封閉就是讓大量不相關(guān)的蛋白質(zhì)充填這些空隙,從而排斥在ELISA其后的步驟中干擾物質(zhì)的再吸附。封閉的手續(xù)與包被相類似。*常用的封閉劑是0.05%-0.5%的牛血清白蛋白,也有用0%的小牛血清或%明膠作為封閉劑的。脫脂奶粉也是一種良好的封閉劑,其的特點(diǎn)是價(jià)廉,可以高濃度使用(5%)。高質(zhì)量的速溶食用低脂奶粉即可直接當(dāng)作封閉劑使用,但由于奶粉的成份復(fù)雜,而且封閉后的載體不易保存,因此在試劑盒的制備中較少應(yīng)用。
包被用抗原或抗體的濃度,包被的溫度和時(shí)間,包被液的pH等應(yīng)根據(jù)試驗(yàn)的特點(diǎn)和材料的性質(zhì)而選定。抗體和蛋白質(zhì)抗原一般采用pH9.6的碳酸鹽緩沖液作為稀釋液,也有用pH7.2的磷酸鹽緩沖液及pH7~8的Tris-HCL緩沖液作為稀釋液的。通常在TSZ Elisa試劑盒板孔中加入包被液后,在4-8℃冰箱中放置過(guò)夜,37℃中保溫2小時(shí)被認(rèn)為具有同等的包被效果。包被的*適當(dāng)濃度隨載體和包被物的性質(zhì)可有很大的變化,每批材料需通過(guò)實(shí)驗(yàn)與酶結(jié)合物的濃度協(xié)調(diào)選定。一般蛋白質(zhì)的包被濃度為00ng/ml-20ug/ml。

 酶IgG 人磷脂酰(PS)

 酶相關(guān)蛋白IgG 人磷脂酰肌醇蛋白聚糖3(GPC-3)

 酶相關(guān)蛋白2IgG 人磷脂酰肌醇IgG/IgM(PI Ab-IgG/IgM)

 羥化酶IgG 人磷脂爬行酶(PLSCR)

 酪蛋白激酶γ2IgG 人磷脂酶A2(PL-A2)

 酪蛋白激酶2相互作用蛋白IgG 人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶(PCK)

 酪酪肽IgG 人磷酸葡萄糖變位酶(PGM) 

 雷帕霉素靶蛋白IgG 人磷酸肌醇3激酶(PI3K)

 雷帕霉素靶蛋白復(fù)合體2IgG 人磷酸化乙酰(PaCoA) 
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