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曲霉屬通用探針法熒光定量PCR試劑盒試劑準(zhǔn)備

時(shí)間：2020/7/23閱讀：819

. DNA模板

2．對(duì)應(yīng)目的基因的特異引物（在PCR反應(yīng)中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能繼續(xù)按照模板DNA復(fù)制，而不能從無到有，憑空合成。這一小段序列就是你所要有設(shè)計(jì)的引物?？梢允荄NA也可以是RNA，一般20多bp，需要根據(jù)你的模板鏈設(shè)計(jì)。因此，擴(kuò)增不同的基因需要設(shè)計(jì)不同的引物）

3．0×PCR Buffer

4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM

5．Taq酶操作步驟

．在冰浴中，按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。

0×PCR buffer 5μl

dNTP mixl 4μl

引物（0pM） 2μl

引物2（0PM） 2μl

Taq酶（2U/μl） μl

DNA模板（50ng-μg/μl） μl

加ddH2O至 50 μl

視PCR儀有無熱蓋，不加或添加石蠟油。

2．調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心，立即置PCR儀上，執(zhí)行擴(kuò)增。一般：在93℃預(yù)變性3-5min，進(jìn)入循環(huán)擴(kuò)增階段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循環(huán)30-35次，zui后在72℃ 保溫7min。

3．結(jié)束反應(yīng)，PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測(cè)或-20℃保存。

4．PCR的電泳檢測(cè)：如在反應(yīng)管中加有石蠟油，需用00μlLuFang進(jìn)行抽提反應(yīng)混合液，以除去石蠟油；否則，直接取5-0μl電泳檢測(cè)。

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