沃氏葡萄球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒實驗步驟

時間：2021/5/20閱讀：799

沃氏葡萄球菌探針法熒光定量PCR檢測試劑盒實驗步驟：
①取凍存已裂解的細胞，室溫放置5分鐘使其*溶解。
②兩相分離每ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的lvfang，蓋緊管蓋。手動劇烈振蕩管體5秒后，5到30℃孵育2到3分鐘。4℃下2000rpm離心5分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚lvfang相，中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。
③RNA沉淀將水相上層轉(zhuǎn)移到一干凈無RNA酶的離心管中。加等體積異丙醇混合以沉淀其中的RNA，混勻后5到30℃孵育0分鐘后，于4℃下2000rpm 離心0分鐘。此時離心前不可見的RNA沉淀將在管底部和側(cè)壁上形成膠狀沉淀塊。
④RNA清洗移去上清液，每mlTRIZOL試劑裂解的樣品中加入至少ml的75%乙醇(75%乙醇用DEPCH2O配制)，清洗RNA沉淀。混勻后，4℃下7000rpm離心5分鐘。
⑤RNA干燥小心吸去大部分乙醇溶液，使RNA沉淀在室溫空氣中干燥5-0分鐘。
⑥溶解RNA沉淀溶解RNA時，先加入無RNA酶的水40μl用槍反復(fù)吹打幾次，使其*溶解，獲得的RNA溶液保存于-80℃待用。 )紫外吸收法測定先用稀釋用的TE溶液將分光光度計調(diào)零。然后取少量RNA溶液用TE稀釋(:00)后，讀取其在分光光度計260nm和280nm處的吸收值，測定RNA溶液濃度和純度。

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