還原型(GSH)樣本的前處理:
組織、細(xì)菌或細(xì)胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離:
① 準(zhǔn)確稱取0.g組織或收集500萬細(xì)胞,加入mL試劑一和0uL試劑三,用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
② 將勻漿 600g,4℃離心5min。
③ 棄沉淀,將上清液移至另一離心管中,00g,4℃離心0min。
④ 上清液即為除去線粒體的胞漿蛋白,可用于測定從線粒體泄漏的 NOX(此步可選做)。
⑤ 步驟④中的沉淀即為線粒體,加入200uL試劑二和2uL試劑三,超聲波破碎(冰浴,功率20%或200W,超聲3s,間隔0秒,重復(fù)30次),用于NOX活性測定。
血清(漿)樣品:直接檢測。
測定步驟:
、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長至600nm,蒸餾水調(diào)零。
2、樣本測定
()試劑四于37℃(哺乳動(dòng)物)或25℃(其它物種)孵育5min。
(2)在微量石英比色皿或96孔板中加入0μL樣本、200μL試劑四和40μL試劑五,混勻,記錄600nm處20s時(shí)吸光值A(chǔ)和min20s后的吸光值A(chǔ)2,計(jì)算ΔA=A-A2。
NOX 活力單位的計(jì)算
a. 用微量石英比色皿測定的計(jì)算公式如下
、血清(漿)NOX活力的計(jì)算:
單位的定義:每mL血清(漿)在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變化0.0定義為一個(gè)酶活力單位。
NOX(U/mL)=ΔA×V反總÷V樣÷0.0÷T=2500×ΔA
2、組織、細(xì)菌或細(xì)胞中NOX活力的計(jì)算:
()按樣本蛋白濃度計(jì)算:
單位的定義:每mg組織蛋白在每mL反應(yīng)體系中每分鐘A600變
Bis-Acrylamide 25g/00g Amresco 072
(甲叉雙丙烯酰銨)
BisBenzimideHoechstNo.33258 25mg/00mg/500mg Sigma B-2883
(熒光染料)
BisBenzimideHoechstNo.33342 25mg/00mg/500mg Sigma B226
(熒光染料)
Bis-Tris 25g/00g/kg原裝 Amresco 075
Bis-TrisPropane 5g/25g/500g原裝 Sigma B6755
Bluo-Gal 00mg原裝/g原裝 INALCO758-0750
(5-Bromo-3-Indolyl-β-D-
Galactopyranoside)
BM-Cyclin 37.5mg原裝 Roche 799050
(支原體抑制劑)
Boricacid 250g/500g/kg Amresco 0588
(硼酸)
BrainHeartInfusion 00g原裝/500g原裝 BD
(腦心浸液
(無瓊脂))
BrainHeartInfusionAgar 00g原裝 BD 2065
(腦心浸液瓊脂)
BrainHeartInfusionAgar 500g原裝 BD 24820
(腦心浸液瓊脂)
BrainInfusionPower kg 國產(chǎn)
(腦浸粉)