到底elisa試劑盒原理是什么？
免疫測(cè)定技術(shù)的基礎(chǔ)在于抗原抗體之間的特異結(jié)合反應(yīng),所以任何的診斷試劑離不開(kāi)的原料,如抗原抗體,酶等。以前用于免疫測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原,而抗體則為純化抗原免疫動(dòng)物后獲得的多克隆抗體和使用雜交瘤技術(shù)得到的單克隆抗體,而抗原或抗體的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成方法制備。近年來(lái),隨著分子生物學(xué)的發(fā)展,使用基因工程方法制備各種特殊的抗原或抗體及其酶結(jié)合物等免疫測(cè)定試劑幾成為現(xiàn)實(shí)的新一代試劑,各種新型使用的測(cè)定方法也不斷出現(xiàn)。HBsAg試劑特點(diǎn)（檢測(cè)模式：臨床抗體夾心法）：包被抗體為山羊多抗。多抗具有高親和性和對(duì)抗原各種表位的反應(yīng)性。酶表抗體為與HBsAg有不同結(jié)合位點(diǎn)的鼠復(fù)合單位,可測(cè)得HBsAg變異樣品,提高檢測(cè)的特異性（99。98%）提高檢測(cè)的靈敏度,應(yīng)用Parl Ehrich 學(xué)說(shuō)（PEI）HBsAg標(biāo)準(zhǔn)品,對(duì)ad標(biāo)準(zhǔn)品的靈敏度為0。05ng/ml對(duì)ay標(biāo)準(zhǔn)品靈敏度為0。025ng/mlELISA檢測(cè)試劑盒應(yīng)用定性?shī)A心免疫檢測(cè)技術(shù),用合成的HEV多肽抗原包被微孔板板條,這些多肽是中國(guó)型HEV毒株核心氨基酸序列中抗原性很強(qiáng)的肽段,分別來(lái)自于該毒株的開(kāi)放閱讀框2和開(kāi)放閱讀框3。將樣品或標(biāo)準(zhǔn)品加入孔中并孵育,如果其中存在HEV IgM抗體,這些抗體就會(huì)與HEV 的多肽抗原結(jié)合,并固定在上面,洗板除去其它非特異性抗體和樣品中的其它成份。然后加入羊抗人IgM-HRP（辣根過(guò)氧化物酶）酶結(jié)合物,經(jīng)第二次孵育后,酶結(jié)合物就會(huì)與*次孵育結(jié)合上的HEV IgM抗體相結(jié)合,洗板除去未結(jié)合的酶結(jié)合物,加入TMB底物溶液,在第三次孵育時(shí)會(huì)發(fā)生酶-底物反應(yīng),只有那些含有HEV IgM抗體和酶結(jié)合物所形成的復(fù)合物的孔才會(huì)發(fā)生顏色變化,加入硫酸溶液終止酶和底物間的反應(yīng),并在長(zhǎng):450nm處測(cè)量O.D。值,按照本HEV IgM抗體elisa試劑盒的測(cè)試標(biāo)準(zhǔn),O.D。值大于或等于Cut-Off值的樣品被認(rèn)為是初試陽(yáng)性。
操作方法：
雙抗體夾心法：
1、包被：用0.05MPH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1～10μg/ml。在每個(gè)聚苯乙烯板的反應(yīng)孔中加0.1ml，4℃ 隔夜。次日，棄去孔內(nèi)溶液，用洗滌緩沖液洗3次，每次3分鐘。（簡(jiǎn)稱(chēng)洗滌，下同）。
2、加樣：加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中，置37℃ 孵育1小時(shí)。然后洗滌。（同時(shí)做空白孔，陰性對(duì)照孔及陽(yáng)性對(duì)照孔）。
3、加酶標(biāo)抗體：于各反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體（經(jīng)滴定后的稀釋度）0.1ml。37℃ 孵育0.5～1小時(shí)，洗滌。
4、加底物液顯色：于各反應(yīng)孔中加入臨時(shí)配制的TMB底物溶液0.1ml，37℃ 10～30分鐘。
5、終止反應(yīng)：于各反應(yīng)孔中加入2M硫酸0.05ml。
6、結(jié)果判定：可于白色背景上，直接用肉眼觀察結(jié)果：反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深，陽(yáng)性程度越強(qiáng)，陰性反應(yīng)為無(wú)色或極淺，依據(jù)所呈顏色的深淺，以“+”、“-”號(hào)表示。也可測(cè)OD值：在ELISA檢測(cè)儀上，于450nm（若以ABTS顯色，則410nm）處，以空白對(duì)照孔調(diào)零后測(cè)各孔OD值，若大于規(guī)定的陰性對(duì)照OD值的2.1倍，即為陽(yáng)性。
間接法:
1、用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1～10μg/ml，每孔加0.1ml，4℃隔夜；
2、次日洗滌3次；
3、加一定稀釋的待檢樣品（未知抗體）0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時(shí),洗滌；
4、（同時(shí)做空白、陰性及陽(yáng)性孔對(duì)照）于反應(yīng)孔中，加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體（抗抗體）0.1ml；
5.37℃孵育35-60分鐘，洗滌；
6、zui后一遍用DDW洗滌。
其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
優(yōu)勢(shì)試劑*：
人鈣激活*1(CAPN1)ELISA檢測(cè)試劑盒
山羊白介素12B(IL12B)ELISA酶免試劑盒
人硫酸雌酮(E1S)ELISA試劑盒使用
人單核細(xì)胞增多性李斯特菌素O((LLO)ELISA試劑盒
犬孕酮(P)ELISA試劑盒,96T/48T,KB13743
小鼠鑰孔蟲(chóng)戚血藍(lán)蛋白(KLH)ELISA酶免試劑盒,Mice keyhole limpet hemocyanin (KLH) ELISA kit
鴨病毒性腸炎病毒(DEV)ELISA酶免試劑盒
小鼠絨毛膜*β(β-CG)ELISA試劑盒使用
人甲狀旁腺激素(PTH)ELISA試劑盒,96T/48T,KB12481
山羊轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β3(TGFβ3)ELISA試劑盒
大鼠D乳酸脫氫酶(DLDH)ELISA試劑盒,96T/48T,KB15764
人孕酮受體(PGR)ELISA試劑盒,96T/48T,KB12077
*(LH)ELISA酶免試劑盒
小鼠骨橋素(OPN)ELISA試劑盒
大鼠膠原酶I(CollagenaseI)ELISA酶免試劑盒
人可溶性CD276分子(sCD276/sB7H3)ELISA酶免試劑盒,Human soluble CD276 molecule (sCD276 / sB7H3) ELISA kit
人叉頭框蛋白01(FoxO1)ELISA試劑盒使用
人E選擇素(E-Selectin/CD62E)ELISA試劑盒
人溴脫氧核苷*(BrdU)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
人抗*脫羧酶抗體(Anti-GAD)ELISA酶免試劑盒,Human glutamic acid decarboxylase antibody (Anti-GAD) ELISA kit.
兔子Ⅰ型膠原(ColⅠ)ELISA酶免試劑盒
雞免疫球蛋白MELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
小鼠16α羥基雌酮1(16-αOHE-1)ELISA檢測(cè)試劑盒
人Ⅱ型膠原交聯(lián)C端肽(CTXⅡ)ELISA酶免試劑盒,People Ⅱ collagen cross-linked C-opeptide (CTXⅡ) ELISA kit
牛β乳球蛋白(βLg)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
小鼠血管緊張素轉(zhuǎn)化酶(ACE)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
人白介素18(IL-18)ELISA試劑盒,96T/48T,KB10711
小鼠P選擇素(P-Selectin/CD62P)ELISA試劑盒使用
山羊補(bǔ)體蛋白3(C3)ELISA檢測(cè)試劑盒
兔子*(GSH)ELISA測(cè)定試劑盒,96T/48T
大鼠β-防御素(β-Defensins)ELISA酶免試劑盒,Rat βdefensin (β-Defensins) ELISA kit.
牛白介素-12(IL-12)ELISA酶免試劑盒
豬白介素12(IL12)ELISA檢測(cè)試劑盒
牛白介素15(IL15)ELISA試劑盒,96T/48T,KB16242
兔抗腦組織抗體(ABAb)ELISA試劑盒使用
猴過(guò)氧化氫酶(CAT)ELISA酶免試劑盒,Monkey catalase (CAT) ELISA kit
犬α1微球蛋白(α1MG)ELISA檢測(cè)試劑盒
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