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免疫組化ABC法操作步驟

2012-7-23  閱讀(2458)

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上海勁馬實驗設(shè)備有限公司提供專業(yè)免疫組化代測,專業(yè)elisa試劑盒供應(yīng)商。訂購

1、4%多聚甲醛常規(guī)灌注固定,取材并置20%蔗糖溶液(4℃)過夜,蠟塊制作,切片,貼片。0.01M PBS清洗5min×3次;

2、脫蠟、水化:用二甲苯兩次10min,用梯度乙醇由低濃度到高濃度進行水化;

3、加入0.3%的過氧化氫甲醇溶液(甲醇80ml+0.01M PBS 100ml+30%過氧化氫)30min,以消除內(nèi)源性過氧化物酶的影響,0.01M PBS清洗5min×3次;

4、加入0.3% Triton X-100(0.3ml Triton X-100+0.01 M PBS 100ml)30min,以增加細(xì)胞的通透性,0.01M PBS清洗5min×3次;

5、加入用血清稀釋液(牛血清白蛋白1.00g+0.01M PBS 100ml+疊氮納0.08g)稀釋的一抗,4℃存放24-48h。吸去抗體,0.01M PBS洗5min×3次;

6、加入0.01M PBS稀釋的的二抗,室溫孵育2h。0.01M PBS洗5min×3次;

7、加入ABC復(fù)合物之類的抗體,室溫孵育2h,0.01M PBS洗5min×3次;蒸餾水迅速沖三次;

8、加入顯色液,進行免疫組織化學(xué)顯色,時間一般3~10min,可不時在顯微鏡下進行觀察,待細(xì)胞著色而背底顏色較淡時馬上吸去顯色液,用蒸餾水迅速沖三次后加入0.01M PBS終止反應(yīng);

9、蘇木素復(fù)染;

10、梯度酒精脫水之后,透明,封片,拍照。

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