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上海勁馬實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司
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檢測范圍
0.8μg/L -26μg/L
使用目的
本試劑盒用于測定雞血清、血漿及相關(guān)液體樣本中高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）含量。
實(shí)驗(yàn)原理
本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本中雞高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）水平。用純化的雞高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入高遷移率族蛋白B1（HMGB-1），再與HRP標(biāo)記的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物，經(jīng)過徹-底洗滌后加底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度（OD值），通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中雞高遷移率族蛋白B1（HMGB-1）濃度。
標(biāo)本要求
1．標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取，提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行，提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn)，可將標(biāo)本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融
2．不能檢測含NaN3的樣品，因NaN3抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。
操作步驟
1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋：本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。
24μg/L | 5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
12μg/L | 4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
6μg/L | 3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
3μg/L | 2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
1.5μg/L | 1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品 | 150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 |
2. 加樣：分別設(shè)空白孔（空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑，其余各步操作相同）、標(biāo)準(zhǔn)孔、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品準(zhǔn)確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品最終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻。
3. 溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
4. 配液：將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用
5. 洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶標(biāo)試劑50μl，空白孔除外。
7. 溫育：操作同3。
8. 洗滌：操作同5。
9. 顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色10分鐘.
10. 終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色）。
11. 測定：以空白孔調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
完整版說明書可咨詢我司業(yè)務(wù)員。上海勁馬生物科技有限公司是國內(nèi)ELISA試劑盒優(yōu)質(zhì)供應(yīng)商，代理銷售不同ELISA試劑盒品牌的進(jìn)口/國產(chǎn)ELISA試劑盒，專業(yè)供應(yīng)科研實(shí)驗(yàn)所需的培養(yǎng)基，抗體，動(dòng)物血清血漿，標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照品，化學(xué)試劑，酶聯(lián)免疫試劑盒，白介素試劑盒，金標(biāo)檢測試劑盒，微生物，蛋白質(zhì)，ELISA種屬涵蓋廣，憑借多年行業(yè)經(jīng)驗(yàn)，完善的售后服務(wù)，高質(zhì)量的產(chǎn)品。如果您有實(shí)驗(yàn)上的問題歡迎來咨詢。
