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試驗原理：
NPY試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗（ELISA）.已知NPY濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將NPY和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后，加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌，去除未結(jié)合的酶結(jié)合物，然后加入底物A、B，和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中NPY的濃度呈比例關(guān)系。
試劑盒內(nèi)容及其配制：
| 試劑盒成份 | 96孔配置 | 48孔配置 |
| 96/48人份酶標板 | 1塊板（96T） | 半塊板（48T） |
| 塑料膜板蓋 | 1塊 | 半塊 |
| 標準品：1000pg/ml | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） |
| 空白對照 | 1瓶（1.0ml） | 1瓶（0.5ml） |
| 標準品稀釋緩沖液 | 1瓶（8.0ml） | 1瓶（4.0ml） |
| 生物素標記的抗NPY抗體 | 1瓶（8.0ml） | 1瓶（4.0ml） |
| 親和鏈酶素-HRP | 1瓶（12ml） | 1瓶（5ml） |
| 洗滌緩沖液 | 1瓶（20ml） | 1瓶（10ml） |
| 底物A | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） |
| 底物B | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） |
| 終止液 | 1瓶（6.0ml） | 1瓶（3.0ml） |
自備材料：
1. 蒸餾水。
2. 加樣器：5ul、10ul、50ul、100ul、200ul、500ul、1000ul。
3. 振蕩器及磁力攪拌器等。
試劑的準備：
1. 標準品：標準品的系列稀釋應(yīng)在實驗時準備，不能儲存。稀釋前將標準品振蕩混勻。稀釋比例按下表中進行：
| 1000 pg/ml | （6號標準品） | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
| 500 pg/ml | （5號標準品） | 100ul的原倍標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 250 pg/ml | （4號標準品） | 100ul的5號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 125 pg/ml | （3號標準品） | 100ul的4號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 62.5 pg/ml | （2號標準品） | 100ul的3號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 31.5 pg/ml | （1號標準品） | 100ul的2號標準品加入100ul的標準品稀釋液 |
| 0 pg/ml | （空白對照） | 原倍濃度不用稀釋直接加入50ul |
2. 洗滌緩沖液（50×）的稀釋：蒸餾水50倍稀釋。
試劑盒性能：
1. 靈敏度：zui小的檢測濃度小于1號標準品。稀釋度的線性。樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.990。
2. 特異性：不與其它細胞因子反應(yīng)。
3. 重復(fù)性：板內(nèi)、板間變異系數(shù)均小于10%。
操作步驟：
1. 使用前，將所有試劑充分混勻。不要使液體產(chǎn)生大量的泡沫，以免加樣時加入大量的氣泡，產(chǎn)生加樣上的誤差。
2. 根據(jù)待測樣品數(shù)量加上標準品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個標準品和空白孔建議做復(fù)孔。每個樣品根據(jù)自己的數(shù)量來定，能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
3. 加入稀釋好后的標準品50ul于反應(yīng)孔、加入待測樣品50ul于反應(yīng)孔內(nèi)。立即加入50ul的生物素標記的抗體。蓋上膜板，輕輕振蕩混勻，
4. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
5. 每孔加入100ul的親和鏈酶素-HRP，輕輕振蕩混勻，
6. 甩去孔內(nèi)液體，每孔加滿洗滌液，振蕩30秒，甩去洗滌液，用吸水紙拍干。重復(fù)此操作4次。如果用洗板機洗滌，洗滌次數(shù)增加一次。
7. 每孔加入底物A、B各50ul，輕輕振蕩混勻，
8. 取出酶標板，迅速加入50ul終止液，加入終止液后應(yīng)立即測定結(jié)果。
9. 在450nm波長處測定各孔的OD值。
結(jié) 果 判 斷 與 分 析：
1、 儀器值：于波長450nm的酶標儀上讀取各孔的OD值
2、 以吸光度OD值為縱坐標（Y），相應(yīng)的NPY標準品濃度為橫坐標（X），做得相應(yīng)的曲線，樣品的NPY含量可根據(jù)其OD值由標準曲線換算出相應(yīng)的濃度，再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。
3、 檢測值范圍： 0-1000pg/ml
4、 敏感度：3.9pg/ml
