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*殘留檢驗(yàn)的薄層色譜測定方法
點(diǎn)擊次數(shù)：1407 發(fā)布時(shí)間：2010-10-23
1）試劑和材料 除另有規(guī)定外，所用試劑均為分析純?yōu)檎麴s水。
1.乙酸乙酯
2.二氯甲烷
3.正己烷
4.三氯甲烷
5.特丁醇
6.甲醇
7.丙酮
8.濃鹽酸：密度約1．19g／ml
9.氫氧化鈉溶液：10mol／L水溶液
10.熒光胺溶液：30rug熒光胺溶于250ml丙酮中，可用于6～9塊展開板
11.二乙胺
12.展開溶劑：三氯甲烷—特丁醇（80+20），當(dāng)日新配
13.*緩沖液：0．2mol／I水溶液。使用前用10mol／L氫氧化鈉溶液調(diào)pH值達(dá)到12．25（本步驟需在使用前、在20C室溫的蒸氣浴上進(jìn)行）。
14.磷酸鹽緩沖液：2mol／L水溶液。用2mol／I的磷酸二氫鉀與2mol／I。的*合，得到pH為5．25的緩沖溶液。
15.鹽酸（1．7mol／L）—磷酸鹽緩沖溶液（2mol／L，pH 5．25） （1+1）。
16.磷酸鹽緩沖液
17.*標(biāo)準(zhǔn)晶：純度≥99％。
18.*標(biāo)準(zhǔn)貯備液（1mg／m1）：準(zhǔn)確稱取100rug*（至0．1mg）于100ml容量瓶中，用丙酮溶解并定容后存放在聚乙烯瓶中，于一10~C保存可使用
一個(gè)月。
19.內(nèi)標(biāo)貯備液（1mng／ml）：準(zhǔn)確稱取100mg*（至0．1ing）于100ml容量瓶中，用丙酮溶解并定容后存放在聚乙烯瓶中，于一10C保存可使用一個(gè)月。
20.*標(biāo)準(zhǔn)工作液（10／ug／ml）：移取標(biāo)準(zhǔn)儲備液lml于100mi容量瓶中，加pH 7．6的緩沖溶液至刻度。
21.內(nèi)標(biāo)工作液（10／ug／ml）：移取內(nèi)標(biāo)貯備液lml于100ml容量瓶匯中，加pH 7．6的磷酸鹽緩沖溶液16.至刻度。
22.內(nèi)標(biāo)工作液（2．50ug／ml）：移取內(nèi)標(biāo)工作液（10txg／mi）25ml于100ml容量瓶中，用pH 7.6的磷酸鹽緩沖溶液⑩稀釋至刻度。
23..標(biāo)準(zhǔn)溶液A：含5．00ug／ml的*和2．50ug／mI內(nèi)標(biāo)工作液。移取50mL*標(biāo)準(zhǔn)工作液（10ug／ml）和25ml內(nèi)標(biāo)工作液（10ug／ml）于100ml容量瓶中，用pH 7．6的磷酸鹽緩沖溶液16.稀釋至刻度。
24.標(biāo)準(zhǔn)溶液B：含2．50ug／ml*和2．50ug／ml內(nèi)標(biāo)工作液。移取25ml標(biāo)準(zhǔn)
溶液A于50ml容量瓶中，用內(nèi)標(biāo)工作液（2．50／~g／mi）稀釋至刻度。
25.標(biāo)準(zhǔn)溶液C：含1．25ug／ml*和2，50ug／ml內(nèi)標(biāo)工作液。移取25ml標(biāo)準(zhǔn)
溶液B于50ml容量瓶中，用內(nèi)標(biāo)工作液（2．50ug／ml）稀釋至刻度。
（2）測定步驟
①提取 稱取約2．5g試樣（至0．1g）置于50ml離心管中，加入100,L內(nèi)標(biāo)工作液。另稱取不含*的空白試樣3份，分別加入*標(biāo)準(zhǔn)溶液A、B和C各100FI。（相當(dāng)于試樣中添加*的量分別為o．2mg／kg、0．1mg／kg、0．05rug／kg）。靜置15min后，加入25ml乙酸乙酯，攪拌lmin，蓋上螺旋蓋，于臥式振蕩器上以約250r／min振蕩20min。于2500r／min離心5min后，將上清液轉(zhuǎn)移到另一50ml離心管中。棄去殘?jiān)?br />②凈化 向上述離心管中加入2ml*緩沖溶液，振蕩5min，于2500r／min離心5rain，除去上層有機(jī)層。再加2ml磷酸鹽緩沖溶液，使pH值達(dá)到5．25±0．1[必要時(shí)用氫氧化鈉溶液（1．0mol／L）或鹽酸溶液（1．0mol／L）調(diào)節(jié)pH）。
加5ml正己烷，振蕩5min，于2500r／111111離心5min，棄去上層有機(jī)層。加入10ml二氯甲烷，振蕩5min，于2500r／rain離心5min（如有乳化時(shí)，于3500r／rain離心10min）。將離心管傾斜，*吸除上層水相。注意清除界面處的油脂和雜物。如在水和有機(jī)相之間存在凝膠狀物，不要除去，以免降低回收率。加10PL二乙胺至二氯甲烷中，于40~C氮?dú)饬飨?，蒸發(fā)至近干（切勿蒸干）。蒸發(fā)時(shí)當(dāng)二氯甲烷液面降至5ml時(shí)，用約2ml二氯甲烷洗滌試管內(nèi)壁；降至2．5ml時(shí)，再洗滌1次；降至1．0～1．5mi時(shí)，再洗1次。將殘?jiān)芙庠?00gL甲醇中，旋轉(zhuǎn)混勻30s，靜置，使不溶物沉淀于試管底。溶液供測定用。
③測定
a.薄層色譜掃描條件
光源：氙燈
激發(fā)波長410nm；發(fā)射波長410nm，或根據(jù)不同型號的儀器選擇不同的濾光片
激發(fā)狹縫與發(fā)射狹縫：可根據(jù)斑點(diǎn)大小進(jìn)行調(diào)節(jié)
檢測方式：反射熒光
掃描方式：線性掃描
b.測定 將點(diǎn)樣器調(diào)至85 C，分別點(diǎn)20ul-樣液和加有*及內(nèi)標(biāo)物標(biāo)準(zhǔn)液的試液到薄層板上。按下法進(jìn)行點(diǎn)樣：于距薄層板的底邊約1．o～1．5cm的底線上，距左邊約lcm處開始，每隔lcm順序點(diǎn)樣：樣液，標(biāo)準(zhǔn)液（o．10rug／k8），樣液，樣液，標(biāo)準(zhǔn)液（0．05rug／k8），樣液，樣液，標(biāo)準(zhǔn)液（o．2mg／k8），樣液。共點(diǎn)6個(gè)樣液。
用甲醇作展開劑，展開薄層板至前沿距甲醇液面達(dá)lcm時(shí)，取出薄層板置于烘箱（100~C）干燥1rain。然后在盛有三氯甲烷—特丁醇（80+20）混合液的飽和展開槽中展開，至前沿距液面6cm處。取出，置于烘箱（100℃）干燥lmin。
將層析板*浸沒于熒光胺溶液l一2s，然后置于室溫暗處15—30rain后，在紫外燈下觀測，測量各斑點(diǎn)的只f值。在上述色譜條件下，*的兄值約為o．83，磺胺吡癥的疋f值約為o．71。然后按上述掃描條件進(jìn)行薄層掃描。
（3）靈敏度和回收率
本方法的測定低限為20mg／kg。
在0．02～0.20mg／kg添加濃度水平上，回收率范圍為89．3％～96．5％