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血液3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶光譜法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書

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血液3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶光譜法定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說明書 GMS50137.3 v.A
主要用途
GENMED血液3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶光譜法定量檢測(cè)試劑是一種旨在運(yùn)用3-羥-3-甲戊二酰*作為底物,在還原酶的催化下,還原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化后吸光峰值的降低,即采用光譜法來測(cè)定血液樣品中酶活性的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)由大師級(jí)科學(xué)家精心研制、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種動(dòng)物或人體血液樣品(血清、血漿、紅細(xì)胞等)或純化酶樣品3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶的活性檢測(cè),以及抑制劑篩選。產(chǎn)品嚴(yán)格無菌,即到即用,操作簡(jiǎn)捷,性能穩(wěn)定。
技術(shù)背景
甲戊二羥酸通路(mevalonate pathway),又稱為3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶通路或甲戊二羥酸依賴性通路,是所有高等真核生物和許多細(xì)菌具有的重要的細(xì)胞代謝通路,用于體內(nèi)產(chǎn)生二甲基丙烯焦磷酸(dimethylallyl pyrophosphate;DMAPP)和異戊二烯焦磷酸(isopentenyl pyrophosphate;IPP)作為生物大分子合成的基礎(chǔ),包括蛋白質(zhì)異戊二烯化、細(xì)胞膜維護(hù)、激素合成、蛋白固著、蛋白糖化等。3-羥-3-甲戊二酰*還原酶(3-hydroxy-3-methyl-glutaryl-CoA reductase;HMGR;EC1.1.1.34)是控制甲戊二羥酸通路的關(guān)鍵的酶,調(diào)節(jié)*和類異戊二烯脂分子的產(chǎn)生。HMG-COA還原酶位于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜上,含有8個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域,其中活性結(jié)構(gòu)域在細(xì)胞漿里。HMG-COA還原酶是許多降脂藥物的靶標(biāo),包括lovastatin (Mevacor)、atorvastatin (Lipitor)、pravastatin(Pravachol)和simvastatin(Zocor)。在HMG-COA還原酶的催化下,將4個(gè)電子的3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原為甲戊二羥酸(mevalonate),同時(shí)產(chǎn)生還原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸(reduced nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADPH)被氧化為氧化型*腺嘌呤二核苷酸磷酸(oxidized nicotinamide adenine dinucleotide phosphate;NADP),其氧化后的吸光峰值變化(340nm 波長(zhǎng)),來定量分析3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶的活性。3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶反應(yīng)系統(tǒng)為:
產(chǎn)品內(nèi)容
GENMED緩沖液(Reagent A) 毫升
GENMED反應(yīng)液(Reagent B) 微升
GENMED底物液(Reagent C) 微升
GENMED陰性液(Reagent D) 微升
產(chǎn)品說明書 1份
保存方式
1
保存GENMED緩沖液(Reagent A)、GENMED反應(yīng)液(Reagent B)和GENMED底物液(Reagent C)在-20℃冰箱里;其余的保存在4℃冰箱里;GENMED反應(yīng)液(Reagent B)和GENMED底物液(Reagent C)避免光照;有效保證6月
用戶自備
抗凝管:用于血液樣品采集的容器
1.5毫升離心管:用于樣品操作和保存的容器
(微型)臺(tái)式離心機(jī):用于樣品制備
比色皿或酶標(biāo)板:用于光譜分析的容器
分光光度儀或酶標(biāo)儀:用于光譜分析
實(shí)驗(yàn)步驟
一、 樣品準(zhǔn)備
選擇一:血漿樣品
1. 準(zhǔn)備好抗凝管
2. 抽取1毫升血液,置于抗凝管里
3. 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為2000g(或5000 RPM,例如eppendorf 5415)
4. 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血漿成分(注意:避免觸碰白色液體層)
5. 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)
6. 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存
選擇二:血清樣品
1. 準(zhǔn)備好不含抗凝劑的儲(chǔ)存管(注意:避免使用溶血樣品)
2. 抽取1毫升血液,置于儲(chǔ)存管里
3. 室溫下,靜置30分鐘,直至血液凝結(jié)
4. 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為2000g(或5000 RPM,例如eppendorf 5415)
5. 小心移取上層黃色液體到新的1.5毫升離心管――此為血清成分(注意:避免觸碰白色液體層)
6. 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)
7. 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存
選擇三:紅細(xì)胞樣品
1. 準(zhǔn)備好抗凝管
2. 抽取1毫升血液,置于抗凝管里
3. 放進(jìn)4℃微型臺(tái)式離心機(jī)離心15分鐘,速度為2000g(或5000 RPM,例如eppendorf 5415)
4. 小心抽去上層黃色液體 (注意:避免觸碰白色液體層)
5. 小心移取500微升管底紅細(xì)胞到新的1.5毫升離心管(注意:避免觸碰上面白色液體層)
6. 加入500微升預(yù)冷的無離子水
7. 渦旋震蕩15秒
8. 移取10微升進(jìn)行蛋白定量檢測(cè)(注意:建議使用GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-
2
GMS30030.1)
9. 即刻置于冰槽里備用或放進(jìn)-70℃冰箱里保存
二、 測(cè)定準(zhǔn)備
1. 開啟并設(shè)定好分光光度儀(溫度為37℃):波長(zhǎng)340nm,間隔5分鐘,讀數(shù)2次(共10分鐘),并置零
2. 從-20℃冰箱里取出試劑,置于冰槽里融化;GENMED反應(yīng)液(Reagent B)和GENMED底物液(Reagent C)避免光照
三、 背景對(duì)照測(cè)定
1. 移取xx微升GENMED緩沖液(Reagent A)到新的比色皿
2. 加入xx微升GENMED反應(yīng)液(Reagent B)
3. 加入xx微升GENMED底物液(Reagent C)
4. 上下傾倒數(shù)次,混勻
5. 在37℃溫度下孵育3分鐘
6. 加入xx微升GENMED陰性液(Reagent D)
7. 上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))
8. 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為背景空對(duì)照(0分鐘讀數(shù)-10分鐘讀數(shù))
四、 樣品測(cè)定
1. 移取xx微升GENMED緩沖液(Reagent A)到新的比色皿
2. 加入xx微升GENMED反應(yīng)液(Reagent B)
3. 加入xx微升GENMED底物液(Reagent C)
4. 上下傾倒數(shù)次,混勻
5. 在37℃溫度下孵育3分鐘
6. 加入20微升待測(cè)樣品(500微克蛋白)(注意:樣品須清澈)
7. 上下傾倒數(shù)次,混勻(限定在3秒之內(nèi))
8. 即刻放進(jìn)分光光度儀檢測(cè),此為樣品讀數(shù)(0分鐘讀數(shù)-10分鐘讀數(shù))
五、計(jì)算樣品活性
[(樣品讀數(shù)-背景讀數(shù))X樣品稀釋倍數(shù)X (分鐘)]=單位/毫升÷(樣品蛋白濃度)毫克/毫升=單位/毫克
單位=微摩爾NADPH /分鐘
六、 酶標(biāo)板測(cè)定
1. 在96孔酶標(biāo)板上做好相應(yīng)標(biāo)記:背景對(duì)照和樣品
2. 分別移取xx微升GENMED緩沖液(Reagent A)到96孔板中
3. 分別加入xx微升GENMED反應(yīng)液(Reagent B)
3
4. 分別加入xx微升GENMED底物液(Reagent C)
5. 輕輕搖動(dòng)96孔酶標(biāo)板
6. 在37℃溫度下孵育3分鐘
7. 分別加入xx微升GENMED陰性液(Reagent D)或待測(cè)樣品(500微克蛋白)到相應(yīng)孔中(注意:樣品須清澈)
8. 輕輕搖動(dòng)酶標(biāo)板
9. 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè):0分鐘讀數(shù)和10分鐘讀數(shù)
10.活性計(jì)算:
單位=微摩爾長(zhǎng)NADPH /分鐘
注意事項(xiàng)
1. 本產(chǎn)品為20次操作,包括背景對(duì)照
2. 操作時(shí),須戴手套
3. 系統(tǒng)操作過程中,背景測(cè)定只需1次
4. 建議使用比色皿測(cè)定
5. 樣品須澄清,至關(guān)重要
6. 加樣后3秒內(nèi)光譜測(cè)定
7. 測(cè)定值由高到低變化;測(cè)定持續(xù)10分鐘
8. 光譜測(cè)定后,比色皿須清洗*
9. 樣本測(cè)定0分鐘讀數(shù)高于10分鐘讀數(shù)表明具有酶活性
10.如果10分鐘讀數(shù)高于0分鐘讀數(shù),表明樣本沒有活性或檢測(cè)不到
11.建議待測(cè)樣本蛋白濃度為500微克/20微升(本公司提供 GENMED Bradford蛋白質(zhì)濃度定量試劑盒-GMS30030.1)
12.如果待測(cè)樣品濃度過高或過低,可以調(diào)整樣品濃度
13.通常細(xì)胞3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶活性很低,為皮摩爾級(jí),吸光讀數(shù)差值微小
14.如果樣本干擾較大,建議使用GENMED血液3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒-GMS50358.3
15.3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶單位活性定義為:在37℃,pH 7.5條件下,每分鐘內(nèi)氧化1納摩爾還原型*腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)所需的酶量作為一個(gè)活性單位
16.本公司提供系列甲戊二羥酸(MEVALONATE)通路分析試劑產(chǎn)品
質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)
1. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
2. 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感
使用承諾
杰美基因秉著“信譽(yù)至上、客戶滿意、質(zhì)量承諾”的宗旨為我們的用戶提供產(chǎn)品和服務(wù)。用戶收到貨后,應(yīng)按照產(chǎn)品說明書上的規(guī)定妥善保管并在有效期內(nèi)使用。我們的產(chǎn)品在銷售前已作嚴(yán)格的質(zhì)量鑒定,
4
保證說明書所述的使用效果。在貨到后10天內(nèi)若發(fā)現(xiàn)確屬本產(chǎn)品的質(zhì)量問題,請(qǐng)立即以書面形式(實(shí)驗(yàn)報(bào)告)與本公司,并將該產(chǎn)品退回,經(jīng)檢驗(yàn)確系產(chǎn)品質(zhì)量所致,本公司負(fù)責(zé)更換產(chǎn)品。如系使用者錯(cuò)誤操作所致,本公司不承擔(dān)由此造成的損失。
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編號(hào) 名稱 規(guī)格
GMS50137.3 GENMED血液3-羥-3-甲戊二酰*還原酶光譜法定量檢測(cè)試劑盒 20次
GMS50137.3A GENMED緩沖液(Reagent A) 5毫升
GMS50137.3B GENMED反應(yīng)液(Reagent B) 5毫升
GMS50137.3C GENMED底物液(Reagent C) 5毫升
GMS50137.3D GENMED陰性液(Reagent D) 5毫升
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產(chǎn)品編號(hào)
名稱
規(guī)格
GMS50137.1
細(xì)胞3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶光譜法定量檢測(cè)試劑盒
20次
GMS50137.2
組織3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶光譜法定量檢測(cè)試劑盒
20次
GMS50137.3
血液3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶光譜法定量檢測(cè)試劑盒
20次
GMS50358.1
細(xì)胞3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
20次
GMS50358.2
組織3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
20次
GMS50358.3
血液3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶活性比色法定量檢測(cè)試劑盒
20次
GMS10187
3-羥-3-甲戊二酰*(HMG-COA)還原酶待測(cè)樣品制備試劑盒
20次

 

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