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上海銳谷生物科技有限公司

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瓊脂糖凝膠4B sapharose 4B 使用說明介紹

最近更新時間:2010-12-11

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點擊次數(shù):18 發(fā)布時間:2010-11-24 20:46:10

 

瓊脂糖凝膠4B產(chǎn)品說明書

瓊脂糖凝膠4B是用4%濃度瓊脂糖制備成的球型顆粒,作為凝膠層析介質(zhì)使用。

1. 外觀

本品為乳白色球狀凝膠,無嗅、無味、無肉眼可見雜質(zhì)。

2. 理化指標(biāo)

項       目

指       標(biāo)

基質(zhì)

4%瓊脂糖凝膠

排阻極限

60000~20×106 (球蛋白

形狀

球型

粒徑

45~165 μm

zui高流速

70-140 cm/h*

耐壓

0.03 MPa

耐熱

pH7水中4524h

pH適用范圍

4~9 (長時間), 3~11短時間,在位清洗

化學(xué)穩(wěn)定性

可耐8mol/L尿素、6mol/L鹽酸胍

 *檢測條件: 層析柱10mm×300mm  *柱床高15cm,25℃, 流動相為0.1mol/LNaCl

3包裝

產(chǎn)品以聚胺酯瓶密封包裝,外貼標(biāo)簽,注明“品名、體積、顆粒大小、” 等內(nèi)容。

4貯存

產(chǎn)品應(yīng)密封貯存在4~25℃(保存溶液為20% 乙醇),通風(fēng)、干燥、清潔的地方。不能冷凍。

用過的柱子貯存在4℃(20% 乙醇)。

5注意事項

本品應(yīng)避免與氧化劑接觸,避免長時間暴露在空氣中

6.運輸

運輸中應(yīng)避免日曬、雨淋、重壓,嚴禁與有毒、有害物品混運。

7.保質(zhì)期

5年。

8.應(yīng)用

本產(chǎn)品為傳統(tǒng)的瓊脂糖介質(zhì),非特異性吸附低,回收率高,可多次重復(fù)使用等特點,用于分子量差異大、對分辨率要求不高的樣品的凝膠層析純化。下面簡要介紹介質(zhì)的使用過程。

8.裝柱

凝膠過濾介質(zhì)的使用對裝柱的要求較高,為了保證分離效果,一般通過柱子上加一個裝柱器來使分離柱裝滿凝膠,或采用帶有軸向加壓裝置的柱子。凝膠柱床一般高于60cm。裝柱效果可用染料或丙酮-水溶液進行檢驗。

以下過程為通用介質(zhì)裝填過程。若為帶有軸向加壓裝置的柱子,可在柱床穩(wěn)定后將柱床壓緊,接好管路。

⑴讓所有的材料和試劑達到室溫。配制緩沖液。凝膠層析上樣、平衡和洗脫只用一種低鹽濃度的緩沖液。

 ⑵選擇一根一定直徑的柱子,長約30~60cm,根據(jù)柱子大小取所需量的凝膠(約為柱床體積的1.15倍),清洗掉20%乙醇,抽干,用緩沖液(按凝膠:緩沖液=31的比例)配成勻漿。勻漿作脫氣處理。不要劇烈攪動,以免攪壞微球。

⑶將柱內(nèi)及柱子底端用水或緩沖液潤濕并保持一小段液位(液面略高于濾膜),務(wù)必使底端無氣泡。

⑷  用玻璃棒引導(dǎo)勻漿沿著柱內(nèi)壁一次性倒入柱內(nèi),注意勿使產(chǎn)生氣泡。打開柱子出液口,使凝膠在柱內(nèi)自由沉降,連結(jié)好柱子頂端柱頭。

 打開蠕動泵,讓緩沖液緩慢流過,使柱床穩(wěn)定。

用一個裝柱器輔助裝柱。裝完后柱床上端輕輕刮平,上好柱頭。

8.2平衡

讓緩沖液以一定流速流過柱子,到流出液電導(dǎo)和pH不變。

8.3上樣

⑴樣品用緩沖液配制,渾濁的樣品要離心和過濾后上樣。含鹽量過大、濃度過小的樣品要先做處理,再上樣。

⑵介質(zhì)對樣品組分的分離是按組分分子量大小進行的,分子量大的先流出來。

⑶上樣體積約為柱體積的1~2%,越小分離越好。

8.4洗脫

用緩沖液洗脫,洗脫中保持流速、緩沖液組成不變。

8.5再生

一般用緩沖液洗到平衡,可再次使用。

8.6注意:在裝柱、使用和保存柱子的時候,始終要避免柱子流干氣泡進入。

 

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