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BMC Genomics：鑒定蟹卵巢小RNA組
點擊次數(shù)：844 發(fā)布時間：2014-7-26
microRNA（miRNA）是非編碼小RNA分子，與靶信使RNA（mRNA）的3'-非翻譯區(qū)（UTR）堿基配對，下調(diào)基因表達。然而，關(guān)于十足目甲殼動物miRNA的詳細信息并不多見。上海海洋大學(xué)邱高峰教授帶領(lǐng)的團隊早期研究發(fā)現(xiàn)，中華絨螯蟹（Eriocheir sinensis）的細胞周期蛋白B（cyclin B）的3'-UTR上存在許多miRNA結(jié)合位點，暗示miRNA可能在轉(zhuǎn)錄后水平調(diào)控細胞周期蛋白B。在本研究中，邱教授團隊采用測序技術(shù)對中華絨螯蟹的卵巢小RNA組進行了全面鑒定，深入探討了miRNA在卵母細胞減數(shù)分裂過程中的作用*，研究成果發(fā)表在7月刊的BMC Genomics上。
研究人員采用高通量測序?qū)χ腥A絨螯蟹的卵巢小RNA組進行分析（小RNA測序項目由聯(lián)川生物承擔完成），鑒定出來自44個miRNA家族的55個已知miRNAs，并預(yù)測出136個可能存在未知的miRNAs。實驗發(fā)現(xiàn)，四個miRNAs（miR-2，miR-7，miR-79和miR-133）的5'種子序列，互補于細胞周期蛋白B的3'-UTR的miRNA結(jié)合位點。實時定量PCR分析發(fā)現(xiàn)，miR-2和miR-133表達豐度在減數(shù)*次分裂中期（MI）的表達豐度遠高于胚泡期（GV）。但它們的表達增強不依賴于*釋放激素（GnRH）的誘導(dǎo)。研究人員采用雙熒光素酶報告基因測定法進行進一步表達分析，結(jié)果顯示miR-2和miR-133可下調(diào)螃蟹細胞周期蛋白B基因的3'-UTRs的表達，這表明它們能抑制細胞周期蛋白B的翻譯。免疫印跡試驗分析證實，在受精卵中，細胞周期蛋白B蛋白會在減數(shù)*次分裂的中期—后期過渡中*消失，這表明了在接近MI結(jié)束時miR-2和miR-133可能具有破壞細胞周期蛋白B的功能。
此研究中從蟹卵巢小RNA組中鑒定出了大量的miRNAs，同時發(fā)現(xiàn)miR-2和miR-133在卵母細胞減數(shù)分裂成熟過程中表現(xiàn)出差異表達，并可以調(diào)控蟹細胞周期蛋白B基因的3'-UTR。值得注意的是，該研究發(fā)現(xiàn)與zui近報道的miRNA活性在小鼠卵母細胞中被整體抑制是不一致的。
* Song YN, Shi LL, Liu ZQ, Qiu GF. Global analysis of the ovarian microRNA transcriptome: implication for miR-2 and miR-133 regulation of oocyte meiosis in the Chinese mitten crab, Eriocheir sinensis (Crustacea:Decapoda) (2014) BMC Genomics doi: 10.1186/1471-2164-15-547
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