反相色譜在國產(chǎn)液相色譜儀中是應用zui廣泛的技術，主要是因為它適用于分析極大多數(shù)的非極性物質(zhì)和離子化合物。大多數(shù)用于反相色譜的固定相都是天然的疏水物質(zhì)，因此，分析物是按照它們與固定相的疏水相互作用的大小來分離的。
有時國產(chǎn)液相色譜儀反向色譜柱會被污染，是什么原因造成的呢?
反相色譜柱在國產(chǎn)液相色譜儀分離檢測過程中，分析物和基質(zhì)污染能使固定相受到影響，使用過程中應當注意固定相表面特殊性質(zhì)可能與分析物相互作用而使反相色譜柱受到污染產(chǎn)生反壓問題。導致國產(chǎn)液相色譜儀反向色譜柱污染的因素主要有以下兩個。
*，在反相色譜柱上有很多填料，包括聚合物，聚合物表面涂上硅膠和氧化鋁，無機-有機混合物，涂層氧化鋯和石墨化碳都存在于這些鍵合硅膠上，為增加反相色譜柱的應用，常利用各種流動相和添加物作用于反相色譜柱，添加物可以改變或修飾填料的表面，有時候還有可能會污染鍵合相表面。硅膠表面的疏水鍵合相是硅烷醇，殘留的硅烷醇存在于所有的硅膠鍵合填料中，這些硅烷醇具有弱酸性，因此能與某些待分析物反應成為基質(zhì)成分。
第二，樣品中含有的鹽、脂質(zhì)、含脂物質(zhì)、腐質(zhì)酸、疏水蛋白質(zhì)和其它一些物質(zhì)是一些可能在使用時與HPLC柱發(fā)生相互作用的物質(zhì)。部分非常疏水的樣品基質(zhì)，如：玉米油，高芳香物質(zhì)和蠟能粘住固定相裝填表面并且改變其性質(zhì);含有蛋白質(zhì)物質(zhì)的生物流體也能吸附在填料表面。有些物質(zhì)有比待測物或少或大的保留值，那些保留值較小的物質(zhì)如鹽類一般來說在空體積時就被沖出色譜柱，這些非目標產(chǎn)物的被檢測器檢測到而且能形成色譜峰，氣泡，基線上移或者是負峰。如果樣品成分在柱子中有很強的保留而且流動相溶液成分不足以把這些物質(zhì)洗脫下來，多次上樣后，這些吸附在柱子表面的物質(zhì)通常就會積累在柱頭。
以上兩個因素會造成國產(chǎn)液相色譜儀反向色譜柱的污染，所以我們在液相色譜中遇到上面的情況時要格外注意一下。
