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上海酶聯(lián)生物研究所


當前位置：上海酶聯(lián)生物研究所>技術文章>單克隆抗體技術——脾細胞

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技術文章

單克隆抗體技術——脾細胞

閱讀：340發(fā)布時間：2011-12-23

1．材料
（1） 免疫過的血清抗體滴度高的Balb/c鼠。
（2） 1640培養(yǎng)液
（3） 2.5％FCS－1640營養(yǎng)液
2．操作方法
（1） 拉頸或用CO2處死小白鼠。
（2） 將小鼠放于70％酒精中浸泡消毒，取出固定于板上，在無菌條件下取脾。
（3） 把脾放入5ml含有2.5％FCS的1640液中，冰浴下輕輕洗去脾上的紅血球。
（4） 用鑷子輕輕擠壓脾，做成脾細胞懸液，用毛細管將懸液移入小試管中。
（5） 直立小試管3min，使大塊的結締組織下沉，把細胞懸液移入離心管中。
（6） 以2.5％FCS—1640充滿離心管，并以400g離心7min～10min（與此同時應開始制備骨髓細胞）。
（7） 把沉淀用約10ml的新鮮培養(yǎng)液再懸浮。
（8） 重復⑹、⑺步驟。
（9） 計算細胞，以臺盼蘭染色用相差顯微鏡檢查，活細胞數(shù)應高于80％為合格。


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