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上海酶聯(lián)生物研究所
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閱讀：509發(fā)布時間：2012-2-3
免疫擴散技術(shù)(immunodiffusion)是抗原或抗體成分的定性與定量分析方法,其基本原理是抗原-抗體結(jié)合形成復(fù)合物,在抗原和抗體量足夠大并且比例適當時形成肉眼可見的沉淀。通常采用半固態(tài)透明瓊脂凝膠作為支持介質(zhì),在凝膠中打孔裝入抗原(或抗體),抗原與抗體在介質(zhì)中擴散并相遇,如能夠互相結(jié)合則在介質(zhì)中形成沉淀弧帶。單向擴散法(radial immunodiffusion):在含有抗體的凝膠中挖一小槽,注入抗原,使其擴散,如抗原與凝膠中的抗體發(fā)生反應(yīng)形成環(huán)狀乳白色沉淀帶。雙向擴散法:在凝膠板中,打孔后挖幾個小槽;分別滴加抗原與抗體,讓其互相擴散,互相反應(yīng)形成沉淀線。
免疫電泳( immunoelectrophoresis)系鑒定與分離可溶性抗原成分的技術(shù)。將待分析的物質(zhì)置于瓊脂凝膠板上進行電泳分離成區(qū)帶,然后在電泳移動軸相對的方向加入抗血清進行擴散?？乖c抗體結(jié)合后在特定的位置上形成沉淀線。
溶血空斑試驗( hemolytic plaque assay)是一種計數(shù)細胞懸液中抗體生成細胞(漿細胞)的技術(shù)。把抗體產(chǎn)生細胞與高密度羊紅細胞懸液細胞相混,再把混合細胞均勻地懸于半固體瓊脂培養(yǎng)基中。幾小時后,瓊脂上加一層新鮮血清以提供補體。結(jié)合了漿細胞分泌抗體的紅細胞隨之被補體所溶解,在紅色背景上可見透亮空斑,可依此計數(shù)細胞懸液中分泌抗羊紅細胞IgM抗體的細胞。為檢測分泌抗羊紅細胞IgG抗體的細胞,需加入抗IgG抗體，以使羊紅細胞在加入補體后被溶解。將半抗原、多糖或蛋白抗原結(jié)合于羊紅細胞表面,可用以計數(shù)分泌抗這些物質(zhì)的抗體細胞。也可用此方法測定抗體產(chǎn)生細胞分泌免疫球蛋白的種類。
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