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上海酶聯(lián)生物研究所
上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：221發(fā)布時間：2011-12-19
一、MTT是什么
MTT是一種粉末狀化學試劑，全稱為3-（4,5）-dimethylthiahiazo （-z-y1）-3,5-di- phenytetrazoliumromide，漢語化學名為 3-（4，5-二甲基噻唑-2）-2，5-二苯基四氮唑溴鹽，商品名：噻唑藍。是一種黃顏色的染料。
二、MTT法用來做什么
簡單地說：是一種檢測細胞存活和生長的方法。
MTT主要有兩個用途
1．藥物（也包括其他處理方式如放射線照射）對體外培養(yǎng)的細胞毒性的測定；
2．細胞增殖及細胞活性測定。
三、為何MTT可以用來做上述工作
檢測原理為活細胞線粒體中的琥珀酸脫氫酶能使外源性MTT還原為水不溶性的藍紫色結晶甲瓚（Formazan）并沉積在細胞中，而死細胞無此功能。二甲基亞砜（DMSO）能溶解細胞中的甲瓚，用酶標儀在490nm波長處測定其光吸收值，在一定細胞數(shù)范圍內，MTT結晶形成的量與細胞數(shù)成正比。根據(jù)測得的吸光度值（OD值），來判斷活細胞數(shù)量，OD值越大，細胞活性越強（如果是測藥物毒性，則表示藥物毒性越?。?br />四、實驗所需材料
1．MTT 溶液的配制 通常MTT 配成的終濃度為5mg/ml,須用PBS或生理鹽水做溶劑。
市面上一般MTT的包裝為100mg,250mg或1g
1.1對于100mg這樣的小包裝，廠家都是將MTT放入小管中的，個人建議不要再用天平稱量分裝，而應該一次性將其全配制成溶液，如100mg用20mlPBS來溶解。 具休做法：預先在50ml離心管（沒有的話，可用培養(yǎng)瓶替代）加入20ml PBS，從中先吸取500-1000ul PBS裝入含MTT的小管中，吹打若干次后將其移入50ml離心管，然后再混勻?？梢灾貜蛶状危允剐」苤械腗TT不殘留于管內。將MTT*混勻后，用0.22μm濾膜過濾以除去溶液里的細菌，分裝避光（避光袋或是黑紙、錫箔紙包?。┛砷L期保存于-20度。按細胞培養(yǎng)板每孔需加10ul計算，一般每96孔板約需1ml，所以分裝時可考慮每管分裝1ml。
1.2對于大包裝，可按上述方法稱取一部分溶解，也有人將粉劑分裝在EP管里，用的時候現(xiàn)配，直接往培養(yǎng)板中加。
注意事項：
l在配制和保存的過程中，容器用鋁箔紙包住。
l配成的MTT需要無菌，MTT對菌很敏感
lMTT一般現(xiàn)用現(xiàn)配，過濾后4度避光保存兩周內（個人曾做過4度避光保存4周的MTT溶液，效果仍然不錯）有效，或配制成5mg/ml保存在-20度長期保存，避免反復凍融，小劑量分裝，用避光袋或是黑紙、錫箔紙包住避光以免分解。當MTT變?yōu)榛揖G色時就不能再用。
商鋪：http://m.hg1112.cn/st32881/
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