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上海酶聯(lián)生物研究所
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上海酶聯(lián)生物研究所
閱讀：327發(fā)布時(shí)間：2012-11-9
在發(fā)育和干細(xì)胞生物學(xué)、癌癥研究和藥物開發(fā)中，測(cè)定細(xì)胞的增殖能力是一種基本方法。Life Technologies推出了一系列產(chǎn)品，可準(zhǔn)確地測(cè)定細(xì)胞在整個(gè)細(xì)胞周期中的進(jìn)程。Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor為單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群體中的細(xì)胞周期進(jìn)程提供了準(zhǔn)確、靈敏的讀數(shù)。而Click-iT® EdU assay則能檢測(cè)進(jìn)入DNA合成期的細(xì)胞，并將S期的細(xì)胞與其他細(xì)胞區(qū)分開來。研究細(xì)胞周期
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor是基于兩個(gè)細(xì)胞周期調(diào)控蛋白geminin和Cdt1，它們分別與綠色和紅色熒光蛋白相融合。Cdt1和geminin蛋白的降解是時(shí)間上調(diào)控的，這樣G1期只存在Cdt1，G1/S期存在兩種蛋白，而S、G2和M期只存在geminin。
因此，細(xì)胞核的熒光就從紅色（G1）變成綠色（S、G2、M），為監(jiān)控細(xì)胞周期進(jìn)程提供了一種簡(jiǎn)單的方法。FUCCI系統(tǒng)是基于BacMam 2.0技術(shù)，它利用桿狀病毒來實(shí)現(xiàn)哺乳動(dòng)物細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)和瞬時(shí)表達(dá)。BacMam 2.0大大提高了這種基因?qū)肫脚_(tái)的效率和實(shí)用性。過去與BacMam 1.0不兼容的細(xì)胞類型（神經(jīng)元），或轉(zhuǎn)導(dǎo)效果不佳（一些干細(xì)胞、CHO）的細(xì)胞類型，現(xiàn)在也能通過簡(jiǎn)單的一步過程定量轉(zhuǎn)導(dǎo)。BacMam 2.0融合了新元件，大大增強(qiáng)了轉(zhuǎn)導(dǎo)效率和表達(dá)水平，故性能改善。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor實(shí)現(xiàn)了細(xì)胞周期進(jìn)程和細(xì)胞分裂的活細(xì)胞成像，它也與固定和透化處理兼容。這種細(xì)胞周期傳感器是即用型的，操作過程也很簡(jiǎn)單——只需將Premo™ FUCCI試劑加入您的細(xì)胞，孵育過夜，并利用熒光顯微鏡或流式細(xì)胞儀觀察即可。
Click-iT® EdU assay則是我們常用的BrdU分析的替代。在DNA合成過程中，核苷類似物EdU（5-乙炔-2’-脫氧尿苷）摻入新生的DNA鏈中。EdU不是通過抗體檢測(cè)，而是基于一個(gè)click反應(yīng)——銅催化的疊氮化物和炔烴之間的共價(jià)反應(yīng)。EdU核苷中含有炔烴，而Alexa Fluor或Pacific Blue熒光基團(tuán)上含有疊氮化物。利用成像技術(shù)、流式細(xì)胞術(shù)或高內(nèi)涵分析即可判定群體中S期細(xì)胞的比例。Click-iT® EdU標(biāo)記的一個(gè)主要優(yōu)勢(shì)在于熒光疊氮化物（分子量<~1,000）的體積遠(yuǎn)小于BrdU抗體（分子量~150,000），這樣EdU可在溫和條件下?lián)饺?，保留了抗原完整性，從而?shí)現(xiàn)了下游的抗體分析。與BrdU檢測(cè)需要苛刻條件不同，Click-iT®檢測(cè)試劑只需要標(biāo)準(zhǔn)的固定和透化即可。
Premo™ FUCCI Cell Cycle Sensor讓細(xì)胞周期分析可在活細(xì)胞中開展，它與延遲成像結(jié)合時(shí)特別有用。對(duì)于固定細(xì)胞的成像，Click-iT® EdU標(biāo)記實(shí)現(xiàn)了溫和條件下?lián)饺隕dU的檢測(cè)
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