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中級(jí)會(huì)員 | 第16年

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分享有關(guān)質(zhì)粒純度不高解決辦法

時(shí)間:2023/5/12閱讀:1741
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質(zhì)粒純度不高解決辦法

1.混有蛋白:不要使用過(guò)多菌體。經(jīng)溶液P1、P2、P3處理,離心后溶液應(yīng)為澄清的,如果還混有微小蛋白懸浮物可再次離心去除后再進(jìn)行下一步驟。


2. 混有RNA:RNaseA處理不干凈,請(qǐng)減少菌體用量或加入溶液P3之后室溫放置一段時(shí)間。如果溶液P1已保存6個(gè)月以上,請(qǐng)?jiān)谌芤篜1中添加RNaseA。


3. 混有基因組DNA:加入溶液P2和P3后應(yīng)溫和混勻,如果劇烈振蕩,可能把基因組DNA剪切成碎片從而混雜在質(zhì)粒中。如果加入溶液P2后過(guò)于粘稠,無(wú)法溫和混勻,請(qǐng)減少菌體用量。細(xì)菌培養(yǎng)時(shí)間過(guò)長(zhǎng)會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞和DNA的降解,培養(yǎng)時(shí)間不要超過(guò)16小時(shí)。


4. P3溶液加入時(shí)間過(guò)長(zhǎng):P3溶液加入后,放置時(shí)間不要太長(zhǎng),否則有可能會(huì)產(chǎn)生小片段DNA污染。


5. 含大量核酸酶的宿主菌:宿主菌含大量核酸酶,在質(zhì)粒提取過(guò)程中降解質(zhì)粒DNA,影響提取質(zhì)粒DNA的完整性,/好選用不含核酸酶的大腸桿菌宿主菌。


6. 質(zhì)粒的二聚體和多聚體形式:質(zhì)粒復(fù)制過(guò)程中形成的,與宿主菌相關(guān),電泳可檢測(cè)出多條條帶,單酶切處理后可變成單一條帶。


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