乙型肝炎核心抗體定性檢測(cè)

1．檢驗(yàn)?zāi)康?/p>

檢測(cè)HBcAb主要是用于乙型肝炎的的診斷、了解乙肝病毒感染者的感染狀況，另外還用于乙型肝炎的流行病學(xué)調(diào)查。

2．方法原理

采用ELISA競(jìng)爭(zhēng)法，反應(yīng)板的瓊脂微孔包被基因工程重組HBcAb，加入待測(cè)血液，同時(shí)單克隆抗-HBc-HRP，與抗原形成競(jìng)爭(zhēng)結(jié)合，如待測(cè)標(biāo)本中抗-HBc含量高，則抗-HBc-HRP與HBcAg結(jié)合少，加入底物TMB時(shí)顯色淡，反之則顯色深。

3.性能指標(biāo)

此方法快速簡(jiǎn)便、特異性強(qiáng)、檢測(cè)靈敏度度0.5ng/ml。

4．標(biāo)本收集

4．1標(biāo)本類型：靜脈血或動(dòng)脈血的血清或血漿標(biāo)本均可作為檢測(cè)標(biāo)本（抗凝劑可用*、*、ACD、CPDA-1或EDTA，抗凝劑的質(zhì)量應(yīng)符合化試藥品要求——化學(xué)純或分析純，使用的比例以廠家推薦為準(zhǔn)）；其他體液如尿液、唾液、精液、羊水、胸水、腹水、乳汁等體液可以作為檢測(cè)標(biāo)本，但加熱滅活的血清和血庫(kù)的庫(kù)存血?jiǎng)t不宜作為檢測(cè)標(biāo)本。

4．2標(biāo)本留?。阂钥崭篂橐?，收到標(biāo)本后立即離心留取血清或血漿（凝固血應(yīng)待其充分凝固后收集血清），不能有殘留的紅細(xì)胞、纖維蛋白絲，使用肝素治療的病人宜在肝素治療前抽血。

4．3標(biāo)本保存：留取的標(biāo)本在3小時(shí)內(nèi)檢測(cè)，不能立即檢測(cè)的應(yīng)放置于2-8℃zui長(zhǎng)達(dá)14天（可以含有凝塊但要密閉以防蒸發(fā)），或者-10℃zui長(zhǎng)達(dá)14天（不能反復(fù)凍融也不能含有凝塊和紅細(xì)胞）。

4．4標(biāo)本容器：盛放標(biāo)本的容器必須為潔凈的*、玻璃試管、一次性的不同規(guī)格的塑料離心管

4．5標(biāo)本外送：如涉及到需要外送的標(biāo)本，必須以規(guī)定的容器（0.5ml塑料離心管）存放并密封，并根據(jù)郵寄規(guī)則和要求進(jìn)行包裝，運(yùn)送時(shí)還要放入冰袋（2-8℃）或干冰（-10℃）由專人運(yùn)送至地點(diǎn)接收人。

4．6拒收標(biāo)本：凡與4.1-4.5所述內(nèi)容不符的標(biāo)本，檢驗(yàn)人員應(yīng)向臨床或就診者說(shuō)明拒收標(biāo)本的原因，并提出解決的方案或建議。

5．分析系統(tǒng)

5．1分析儀器：為美國(guó)BIO-RAD公司提供的MODEL550型酶標(biāo)儀，儀器校準(zhǔn)請(qǐng)參見(jiàn)儀器操作規(guī)程。

5．2分析試劑：為上海科華公司提供的配套的HBcAb試劑盒，規(guī)格為96test/盒，2-8℃貯存，有效期12個(gè)月；在效期內(nèi)使用試劑。

5．3質(zhì)控試劑：為上海公司提供的配套的HBcAb試劑盒中所附帶的陰、陽(yáng)性對(duì)照，2-8℃貯存，有效期12個(gè)月每月一次質(zhì)控小結(jié)，失控要有記錄及糾正的結(jié)果。

6．操作方法

6．1每孔加入待測(cè)標(biāo)本50微升。

6．2每孔加入酶結(jié)合物1滴，充分混勻，封板，置37℃孵育30分鐘。

6．3手工洗板：棄去孔內(nèi)液體，洗滌液注滿各孔，靜置5秒，甩干，重復(fù)5次后拍干。洗板機(jī)洗板：選擇洗滌5次程序洗板后拍干。

6．4每孔加顯色劑A液、B液各1滴，充分混勻，封板，置37℃ 孵育才1５分鐘。

6．5每孔加入終止液1滴，混勻。

6．６用酶標(biāo)儀讀數(shù)，數(shù)值取波長(zhǎng)450nm（建議使用雙波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀比色，參考波長(zhǎng)630nm），先用空白孔校零，然后讀取各孔OD值。

7．質(zhì)量控制操作程序

7．1每次實(shí)驗(yàn)設(shè)陰性、陽(yáng)性各2孔，并設(shè)空白對(duì)照1孔隨常規(guī)標(biāo)本一起檢測(cè)。

7．2質(zhì)控結(jié)果登記到本年度的“免疫室定性檢測(cè)項(xiàng)目室內(nèi)質(zhì)控登記表”。

7．3一旦發(fā)現(xiàn)失控，應(yīng)即時(shí)查找和分析原因，并在該結(jié)果欄作詳細(xì)的批注和記錄解決的過(guò)程；失控情況處理及原因分析詳見(jiàn)8“失控處理”。

7．4每月進(jìn)行質(zhì)控小結(jié)。并將原始數(shù)據(jù)打印和存盤(pán)留檔。

8．失控處理操作程序

8．1失控情況處理：操作者在分析質(zhì)控結(jié)果時(shí)，如發(fā)現(xiàn)質(zhì)控違背了控制規(guī)則，應(yīng)填寫(xiě)失控報(bào)告單，上交專業(yè)室主管（組長(zhǎng)），由專業(yè)室主管（組長(zhǎng)）做出是否發(fā)出或重測(cè)與質(zhì)控品相關(guān)的該批次病人標(biāo)本檢驗(yàn)報(bào)告的決定。

8．2失控原因分析：失控信號(hào)的出現(xiàn)受多種因素的影響，這些因素包括操作上的失誤、試劑、對(duì)照物的存貯條件改變、儀器維護(hù)不良以及采用的質(zhì)控規(guī)則、控制范圍、一次測(cè)定的質(zhì)控標(biāo)本數(shù)等等。失控信號(hào)一旦出現(xiàn)就意味著與測(cè)定質(zhì)控品相關(guān)的該批病人標(biāo)本報(bào)告可能作廢，此時(shí)首先要查明導(dǎo)致失控的原因，是對(duì)照物本身的原因還是對(duì)照物以外的原因。如是對(duì)照物以外的原因則應(yīng)判為真失控，與對(duì)照物相關(guān)的同批次病人標(biāo)本重新檢測(cè)；如是對(duì)照物本身的原因，則判為假失控，與對(duì)照物相關(guān)的同批次病人標(biāo)本不必重測(cè)，可以發(fā)出報(bào)告。當(dāng)失控信號(hào)出現(xiàn)時(shí)，可以采取以下步驟去尋找原因：

8．2．1立即重測(cè)同一對(duì)照物。此法主要用于查明人為誤差，每一步都應(yīng)該認(rèn)真仔細(xì)的操作，以查明失控的原因；另外，這一步還可以查出偶然誤差，如是偶然誤差，則重測(cè)的質(zhì)控結(jié)果應(yīng)在允許范圍（在控），可以認(rèn)為該批次的病人標(biāo)本不必重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。

8．2．2新開(kāi)一瓶對(duì)照物，重測(cè)失控項(xiàng)目。如果新開(kāi)的對(duì)照血清結(jié)果正常，那么原來(lái)那瓶對(duì)照血清可能過(guò)期或在室溫放置時(shí)間過(guò)長(zhǎng)而變質(zhì)，或者被污染，此時(shí)可以認(rèn)為該批次病人標(biāo)本不必重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。

8．2．3進(jìn)行儀器維護(hù)，重測(cè)失控項(xiàng)目。檢查儀器狀態(tài)，檢查光源是否更換，對(duì)儀器進(jìn)行清洗維護(hù)，然后再測(cè)質(zhì)控品，如在控，則說(shuō)明是儀器原因，該批次的病人標(biāo)本應(yīng)重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。

8．2．4更換另一試劑盒，重測(cè)失控項(xiàng)目。檢查試劑是否過(guò)期或貯存環(huán)境，更換試劑盒重新檢測(cè)對(duì)照物，如在控則說(shuō)明試劑存在問(wèn)題，該批次病人標(biāo)本應(yīng)重測(cè)。如仍不在允許范圍則可以進(jìn)行下一步。

8．2．5請(qǐng)專家?guī)椭?。?步都未能得到在控結(jié)果，如果其他同類型檢驗(yàn)項(xiàng)目在控，則需要試劑廠家尋求技術(shù)幫助；如果其他同類型項(xiàng)目也失控，則需要與儀器廠家工程師取得了。