（一）保存
當(dāng)獲得產(chǎn)生所需的單克隆抗體的雜交瘤細(xì)胞后，必須將一部分雜交瘤細(xì)胞保存，否則在連續(xù)傳代的過(guò)程中，可能產(chǎn)生突變或染色體的漂移以至喪失固有特性或丟失產(chǎn)生抗體的特性。另外在長(zhǎng)期的培養(yǎng)過(guò)程中，難免不發(fā)生污染以至于毀滅。所以必須冷藏保存一部分。保存方法如下：
1．材料
（1） 細(xì)胞：取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期的細(xì)胞。
（2） 10％二甲基亞砜保護(hù)液（二甲基亞砜能損壞濾器，而又被高壓所破壞，所以不能過(guò)濾或高壓消毒。其本身就是 ，無(wú)菌）：含10％二甲基亞砜、20％滅活胎牛血清，70％RPMI—1640液。
（3） 20％FCS—1640培養(yǎng)液：含*100U/ml，*100μg/ml。
（4） 滅菌的2ml安瓶等
2．操作方法
（1） 去掉細(xì)胞培養(yǎng)瓶中的舊的培養(yǎng)液，加入10％FCS—1640液，使細(xì)胞懸浮。
（2） 1 000r/min離心10min，去上清。細(xì)胞沉淀用10％二甲基亞砜保護(hù)液制成懸液，使成1.0×107細(xì)胞／ml。
（3） 取樣，臺(tái)盼蘭染色，計(jì)數(shù)活細(xì)胞，應(yīng)在95％以上。
（4） 用注射器將細(xì)胞分裝安瓶，每瓶0.5ml～1.0ml，熔封安瓶。
（5） 放4℃ 2h。
（6） 放液氮罐氣態(tài)部分（-70℃）15h。
（7） 轉(zhuǎn)入液氮部分。
（二）復(fù)蘇
1．從液氮罐中取出安瓶立即放37℃水浴中速溶。
2．無(wú)菌操作打開(kāi)安瓶，取出細(xì)胞懸液，轉(zhuǎn)入組織培養(yǎng)瓶。
3．逐滴緩慢加入20％FCS－1640培養(yǎng)液3.5ml，這個(gè)過(guò)程延續(xù)3min。
4．5％CO2飽和濕度，37℃培養(yǎng)。
5．4h后棄去培養(yǎng)液上清，加入新鮮的20％FCS－1640培養(yǎng)液。
6．繼續(xù)培養(yǎng)，換液，以至形成單層。
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