IL-7主要由骨髓基質(zhì)細(xì)胞產(chǎn)生，對(duì)B前體細(xì)胞的增殖及T細(xì)胞的發(fā)育有刺激作用。由于IL-7來源局限，主要為骨髓基質(zhì)細(xì)胞及IXN／A6細(xì)胞系，因此，現(xiàn)多采用基因工程技術(shù)，從轉(zhuǎn)染含IL-7eDNA表達(dá)質(zhì)粒的哺乳類細(xì)胞培養(yǎng)上清中獲取。
（一）依賴細(xì)胞株增殖法
IL-7的依賴細(xì)胞株為Clone-K和“N／2bx，具體步驟參照IL-2檢測(cè)。
（二）B前體細(xì)胞短期培養(yǎng)增殖法
1．取小鼠骨髓，制成單細(xì)胞懸液，經(jīng)兩次貼壁去除粘附細(xì)胞，將懸浮細(xì)胞離心后再重懸于1—2mL含5％FCS的IMDM培養(yǎng)液中。
2．將細(xì)胞通過SephadexG-10柱（0．5—1X 5～10em），室溫靜置10rain，以去除殘余的粘附性或基質(zhì)細(xì)胞；用培養(yǎng)液洗脫收集的細(xì)胞即為B前體細(xì)胞，洗滌后調(diào)整細(xì)胞濃度為2．5X105／mL。
3．將待測(cè)樣品在96孔培養(yǎng)板內(nèi)依次稀釋，每孔lOOgL，每個(gè)稀釋度設(shè)3復(fù)孔，并設(shè)陰性對(duì)照及陽(yáng)性對(duì)照；然后每孔加入100~LB前體細(xì)胞，5％C02，37℃培養(yǎng)48h，終止培養(yǎng)前4～8h每孔加入0．5uCi3H-TdR/20uL。
4．收集細(xì)胞測(cè)定cpm值。
（三）活化的胸腺細(xì)胞增殖法
IL-7可促進(jìn)ConA活化的胸腺細(xì)胞增殖，用以檢測(cè)重組IL-7的生物活性。由于IL-1、IL-2、IL-4對(duì)活化的胸腺細(xì)胞也有促增殖作用，故用此方法檢測(cè)混合培養(yǎng)上清標(biāo)本時(shí)應(yīng)用相應(yīng)的中和抗體作阻斷試驗(yàn)。
1．制備BALB／C小鼠胸腺細(xì)胞懸液，用含0．5～5ug／mLConA的*DMEM培養(yǎng)液調(diào)整細(xì)胞濃度為1×107mL。
2．于96孔培養(yǎng)板中每孔加入100uL胸腺細(xì)胞懸液，分別加入IL-7檢測(cè)樣品和一系列稀釋的IL-7標(biāo)準(zhǔn)品，每個(gè)樣品設(shè)3復(fù)孔。
3．37C，5％C02溫箱培養(yǎng)48h，采用3H-TdR摻入法或比色法測(cè)定細(xì)胞增殖反應(yīng)，并計(jì)算IL-7活性單位。
4．注意事項(xiàng)：實(shí)驗(yàn)前應(yīng)先選擇一個(gè)單獨(dú)使用促增殖作用zui低，但與IL-7一起使用有zui大增殖作用的ConA濃度。
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