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技術(shù)文章

IL-4抗CD23單抗檢測法

閱讀：692發(fā)布時間：2012-5-26


IL-4能促進B細(xì)胞膜表面CD23分子表達(dá)，一些BurkittB淋巴細(xì)胞瘤株（如Jijoy細(xì)胞）未受刺激時，CD23表達(dá)水平很低，經(jīng)IL-4刺激后，CD23的表達(dá)呈劑量依賴性增加。用抗CD23單抗間接免疫熒光法染色，可檢測人IL-4活性。

（1）將5X105／mL的Jiioy細(xì)胞培養(yǎng)于含10％FCS的RPMI-1640培養(yǎng)液中。

（2）取對數(shù)生長期細(xì)胞，用新鮮培養(yǎng)液將細(xì)胞配成5X 105／mL，接種于24孔板中，lmL／孔。分別加待測標(biāo)本及標(biāo)準(zhǔn)IL-4（不同稀釋度），并設(shè)陰性對照，培養(yǎng)48～72h。

（3）洗細(xì)胞2次，以106—107／mL濃度的細(xì)胞重懸于含1％BSA，2mmoL／L疊氮鈉的PBS中。將細(xì)胞轉(zhuǎn)人Falcon分析管中，離心棄PBS，加100~L抗CD23單抗（5—10btS／mL），置冰浴中15～30rain，用上述PBS洗2次。

（4）加適當(dāng)稀釋的FITC標(biāo)記的羊抗鼠IgC，置冰浴15～30rain，同上洗細(xì)胞，重懸細(xì)胞于含2mmol／mL疊氮鈉的PBS中。

（5）用流式細(xì)胞儀分析CD23分子的表達(dá)，以陽性細(xì)胞百分率表示，并計算IL-4活性單位；或用熒光顯微鏡觀察CD23分子的表達(dá)。


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