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抗原修復(fù)技術(shù)主要分加熱法抗原修復(fù)技術(shù)和非加熱法抗原修復(fù)技術(shù),加熱法中又分為微波加熱法、單純加熱法和高壓加熱法;非加熱法主要有酶消化和酸水解等方法。
(1) 微波加熱法抗原修復(fù)
(2) 單純加熱法抗原修復(fù)技術(shù):將切片放入盛有檸檬酸緩沖液的容器中,置電爐(600W)上加熱至沸騰,并持續(xù)10min.S.R.Shi等人用單純加熱方法與微波加熱方法比較IHC染色強(qiáng)度,結(jié)果顯示兩種加熱方法導(dǎo)致相同的染色強(qiáng)度。
(3) 高壓加熱法抗原修復(fù)技術(shù)程序:R.W.Shin 等人發(fā)展了含水高壓鍋煮沸方法,來增強(qiáng)福爾馬林固定的腦組織Tau蛋白免疫反應(yīng)性。
(4) 非加熱法抗原修復(fù)技術(shù):非加熱法抗原修復(fù)技術(shù)包括酶消化和酸水解等方法。目前,應(yīng)用zui多的是酶消化法,酶消化是以化學(xué)的方法來打斷醛鍵,修復(fù)抗原。抗原修復(fù)的方法選擇,關(guān)系到組織抗原能否暴露充分,這對(duì)免疫酶組織化學(xué)方法的結(jié)果有很大影響。因此,應(yīng)當(dāng)根據(jù)不同的抗原特點(diǎn),采用不同的修復(fù)方法。對(duì)某些細(xì)胞內(nèi)抗原(如Fas\Bax與FⅧ等)和細(xì)胞間質(zhì)抗原(如Laminin與CoIV等)則需要用酶消化法處理切片。常用的消化酶為*和*。一般說來,*消化能力較*弱,主要用于細(xì)胞內(nèi)抗原的消化;*主要用于細(xì)胞間抗原的消化。實(shí)驗(yàn)中要認(rèn)真參照抗體說明書,進(jìn)行消化酶的選擇。
總之,以高壓加熱方法和微波加熱方法較為穩(wěn)定,高壓加熱法效果優(yōu)于微波加熱方法和單純加熱方法。溶液的濃度對(duì)修復(fù)效果無任何影響,而pH則影響較大。緩沖液以檸檬酸緩沖液和Tris-HC1較常用。一般而言,應(yīng)用加熱法時(shí),溫度高則抗原修復(fù)時(shí)間短。另外,第251醫(yī)院根據(jù)臨床評(píng)理診斷、鑒別診斷和研究的實(shí)際需要,創(chuàng)造了*-尿素聯(lián)合消化技術(shù)、鹽酸水解暴露抗原技術(shù)和MV-表面活性劑Triton X-100(MW-TX)修復(fù)抗原技術(shù)??乖┞痘蚩乖迯?fù)方法較多,其中微波(MW)-枸櫞酸緩沖液使用較多,效果。微波修復(fù)抗原的方法是石蠟切片脫蠟并水洗后放入修復(fù)液中,用250W的輸出功率,待冷卻至室溫按常規(guī)處理。目前抗原修復(fù)技術(shù)已成功應(yīng)用在BioTek全自動(dòng)免疫組化染色儀中。
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