為了提高ELISA的敏感性,在ELISA中人們采用不同的放大機制,建立在ELISA的幾類放大系統(tǒng)。現在向讀者介紹幾個比較重要的ELISA放大系統(tǒng)。
一,生物-親和素系統(tǒng)(Biotin-AvidinSystem,簡稱BAS)
*與抗*之間具有*的親和力,可以縮短反應時間,達到快速檢測的目的。另外,抗體和酶的*標記率高,又不影響其活性,每個親和素分子能結合4個*,每個*能標記大量酶分子,使得ELISA的敏感性大大提高,*與親和素的結合也極為穩(wěn)定,不會在洗滌過程中脫落。BA-ELISA是在常規(guī)ELISA的基礎上,結全*(Biotin)與親和素(Avidin)的高度放大作用,形成的一種檢測方法。BA-ELISA分為:
1,LAB法即酶聯親和素-*標記法(Labeledavidin-biotin,簡稱LAB)。用辣根過氧化物酶直接標記親和素,用*標記第二抗體。
2,ABC法即酶聯親和素-*-過氧化物酶復合物法(Avidin-Biotin-PeroxidaseComplex,簡稱ABC)。如用鏈霉親和素(Streptavidin),則形成鏈霉親和素-酶聯*復合物(Streptavidin-Biotin-PeroxidaesComplex,簡稱SABC)。在ABC法中,用*標記第二抗體,又用*標記過氧化物酶。在使用前30min,親和素與酶聯*以1:1的比例混勻。1個親和素分子結合3個*分子,親和素剩下的1個結合點與標記第二抗體的*結合,親和素起橋聯作用。ABC法比PAP(Peroxidase-antiperoxidasetech-nique)法敏感幾十倍。
3,BAB法即酶聯親和素-*橋法(Bridgedavidin-biotin,簡稱BAB)。用游離親和素(或鏈霉親和素)作為橋聯劑,將*標記后開成的復合物與酶標記*連結起來,然后進行樣品的檢測。由于標記抗體分子上連有多個*,因此,zui終形成的抗原-*標記抗體-親和素-酶標*復合物可積聚大量的酶分子;加入相應底物后,產生強烈的酶促反應,大幅度提高檢測的靈敏度。
二,堿性磷酸酶放大系統(tǒng)
堿性磷酸酶廣大系統(tǒng)包含多種放大機制:堿性磷酸酶不直接催化底物生成有色產物而是催化生成輔酶I(NAD+),輔酶I激活下一輪氧化還原反應,輔酶I啟動的反應為底物的顏色化學轉變提供條件。在供氫體的作用下,底物氧化/還原發(fā)生顏色變化。
三,微粒放大系統(tǒng)
每個適當的微粒表面可以同時結合(或吸附)大量的標記酶和抗體分子。在包含微粒放大系統(tǒng)的夾心ELISA法中,微粒通過結合于其上的第二抗體結合于*抗體。同時微粒上又結合著標記酶,其數量大大多于第二抗體能結合的標記酶,從而得以放大。
四,催化的顯示劑沉積
催化的顯示劑沉積(Catalyzedreporterdeposition,簡稱CARD)。CARD依次使用三套顯示劑:*套顯示劑是聯在抗體上的HRP,它通過抗體與待測抗原的反應結合于固相表面;第二套顯示劑是標有*的*,它受到*顯示劑的氧化催化后沉積于固相表面;第三套顯示劑是標在鏈霉親和素(Streptavidin)上的AP,可被固相上的*捕獲,放大效果非常大。
人非甲基化寡核苷酸(NON)ELISA試劑盒
人蛋白Z(ProteinZ)ELISA試劑盒
人蛋白S(ProteinS)ELISA試劑盒
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