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上海博耀生物科技有限公司
中級(jí)會(huì)員 | 第15年

18021003406

Beckman-AB Sciex品牌
進(jìn)口品牌
*Elisa試劑盒
Elisa試劑盒
細(xì)胞株
抗體
培養(yǎng)基
生物試劑
標(biāo)準(zhǔn)品/對(duì)照品
蛇毒試劑
基因產(chǎn)品
分子生物學(xué)試劑盒
化學(xué)試劑

豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)定量檢測(cè)試劑盒

時(shí)間:2012/7/26閱讀:2958
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僅供科研使用,不得用于醫(yī)學(xué)診斷。

使用前仔細(xì)閱讀本說(shuō)明書(shū)。

     

用于定量檢測(cè)豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中瘟病毒抗體(CSFV Ab)的含量。

工作原理

本試劑盒采用雙位點(diǎn)夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),測(cè)定樣品中豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)的水平。向預(yù)先包被豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)抗體的酶標(biāo)孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品、待測(cè)樣本和HRP標(biāo)記的瘟病毒抗體(CSFV Ab)抗體,經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的組分,然后再加入底物A、B,產(chǎn)生藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成 

1

標(biāo)準(zhǔn)品(120ng/ml

0.5ml 

7

顯色劑A

3ml

2

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3mL

8

顯色劑B

3ml

3

酶標(biāo)包被板

12×4

9

終止液

3ml

4

酶標(biāo)試劑

3ml

10

說(shuō)明書(shū)

1

5

20×濃縮洗滌液

20ml

11

封板膜

2

6

樣品稀釋液

3ml

12

密封袋

1個(gè)

注:標(biāo)準(zhǔn)品用標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液依次稀釋為:120、60、30、15、7.5、0 ng/ml

需要而未提供的試劑和器材

1. 37恒溫箱。

2. 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。

3. 精密移液器及一次性吸頭

4. 蒸餾水,

5. 一次性試管

6. 吸水紙

注意事項(xiàng)

1. 2-8℃取出的試劑盒,在開(kāi)啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差

3. 建議所有標(biāo)準(zhǔn)品、樣本都做雙份檢測(cè)。

4. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).

5. 為避免交叉污染,要避免重復(fù)使用手中的吸頭和封板膜。

6. 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號(hào)的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7. 底物B對(duì)光敏感,避免長(zhǎng)時(shí)間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標(biāo)板內(nèi)的液體;在實(shí)驗(yàn)臺(tái)上鋪墊幾層吸水紙,酶標(biāo)板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復(fù)此過(guò)程數(shù)次。

自動(dòng)洗板:如果有自動(dòng)洗板機(jī),應(yīng)在熟練使用后再用到正式實(shí)驗(yàn)過(guò)程中

標(biāo)本要求 

1不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。

2標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作程序

1. 分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、標(biāo)準(zhǔn)品孔、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上標(biāo)準(zhǔn)品孔中加入標(biāo)準(zhǔn)品50μl;在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測(cè)樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標(biāo)試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動(dòng)混勻,37℃溫育60分鐘。

2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復(fù)5次,拍干。

3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

4. 取出酶標(biāo)板,每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。

5. 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長(zhǎng)下測(cè)量各孔的吸光度值(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

6. 根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)品的濃度及對(duì)應(yīng)的OD值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計(jì)算出對(duì)應(yīng)的樣品濃度。也可以使用各種應(yīng)用軟件來(lái)計(jì)算。應(yīng)記住由于樣品稀釋了的,其實(shí)際濃度應(yīng)該乘以總稀釋倍數(shù)。

操作程序總結(jié)

準(zhǔn)備試劑,樣品和標(biāo)準(zhǔn)品 

加入準(zhǔn)備好的樣品、標(biāo)準(zhǔn)品和酶標(biāo)試劑,37℃反應(yīng)60分鐘

洗板5次,加入顯色液AB,37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD

計(jì)算

檢測(cè)范圍:3.7-120ng/ml。

規(guī)格:    48T/

保存:    2-8 

有效期:  6個(gè)月(2-8℃)。

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