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豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)定量檢測試劑盒

時間:2012/7/26閱讀:2957
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僅供科研使用,不得用于醫(yī)學診斷。

使用前仔細閱讀本說明書。

     

用于定量檢測豬血清、血漿及相關(guān)液體樣本中瘟病毒抗體(CSFV Ab)的含量。

工作原理

本試劑盒采用雙位點夾心酶聯(lián)免疫吸附法(ELISA),測定樣品中豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)的水平。向預先包被豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)抗體的酶標孔中加入標準品、待測樣本和HRP標記的瘟病毒抗體(CSFV Ab)抗體,經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的組分,然后再加入底物A、B,產(chǎn)生藍色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺與樣品中豬瘟病毒抗體(CSFV Ab)的濃度呈正相關(guān)。

試劑盒組成 

1

標準品(120ng/ml

0.5ml 

7

顯色劑A

3ml

2

標準品稀釋液

3mL

8

顯色劑B

3ml

3

酶標包被板

12×4

9

終止液

3ml

4

酶標試劑

3ml

10

說明書

1

5

20×濃縮洗滌液

20ml

11

封板膜

2

6

樣品稀釋液

3ml

12

密封袋

1

注:標準品用標準品稀釋液依次稀釋為:120、60、3015、7.5、0 ng/ml

需要而未提供的試劑和器材

1. 37恒溫箱。

2. 標準規(guī)格酶標儀。

3. 精密移液器及一次性吸頭

4. 蒸餾水,

5. 一次性試管

6. 吸水紙

注意事項

1. 2-8℃取出的試劑盒,在開啟試劑盒之前要室溫平衡至少30分鐘。酶標包被板開封后如未用完,板條應裝入密封袋中保存。

2. 各步加樣均應使用加樣器,并經(jīng)常校對其準確性,以避免試驗誤差

3. 建議所有標準品、樣本都做雙份檢測。

4. 嚴格按照說明書的操作進行,試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

5. 為避免交叉污染,要避免重復使用手中的吸頭和封板膜。

6. 不用的其它試劑應包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。

7. 底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。

洗板方法

手工洗板方法:甩掉酶標板內(nèi)的液體;在實驗臺上鋪墊幾層吸水紙,酶標板朝下用力拍幾次;將稀釋后的洗滌液至少0.35ml注入孔內(nèi),浸泡1-2分鐘。根據(jù)需要,重復此過程數(shù)次。

自動洗板:如果有自動洗板機,應在熟練使用后再用到正式實驗過程中

標本要求 

1不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

2標本采集后盡早進行提取,提取按相關(guān)文獻進行,提取后應盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗,可將標本放于-20℃保存,但應避免反復凍融

操作程序

1. 分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、標準品孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品孔中加入標準品50μl;在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。輕輕晃動混勻,37℃溫育60分鐘。

2. 棄去液體,甩干,每孔加滿稀釋后洗滌液,振蕩30秒,甩去洗滌液,用吸水紙拍干。如此重復5次,拍干。

3. 每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘.

4. 取出酶標板,每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。

5. 測定:以空白孔調(diào)零,在450nm波長下測量各孔的吸光度值(OD值)。 測定應在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

6. 根據(jù)標準品的濃度及對應的OD值計算出標準曲線的直線回歸方程,再根據(jù)樣品的OD值在回歸方程上計算出對應的樣品濃度。也可以使用各種應用軟件來計算。應記住由于樣品稀釋了的,其實際濃度應該乘以總稀釋倍數(shù)。

操作程序總結(jié)

準備試劑,樣品和標準品 

加入準備好的樣品、標準品和酶標試劑,37℃反應60分鐘

洗板5次,加入顯色液A、B37℃顯色15分鐘

加入終止液

15分鐘之內(nèi)讀OD

計算

檢測范圍:3.7-120ng/ml。

規(guī)格:    48T/

保存:    2-8 

有效期:  6個月(2-8℃)。

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