醋酸纖維薄膜的加樣量和電量的選擇

時間：2015/6/29閱讀：326

加樣量
加樣品的多少與電泳條件、樣品的性質(zhì)、染色方法與檢測手段靈敏度密切相關(guān)。作為一般原則，檢測方法越靈敏，加樣量則越少，對分離更有利。如加樣量過大，則電泳后區(qū)帶分離不清楚，甚至互相干擾，染色也較費時。如電泳后用洗脫法定量時，每厘米加樣線上需加樣品0.1 μl~0.5 μl約相當(dāng)于5 μg~1000 μg蛋白。血清蛋白常規(guī)電泳分離時，每厘米加樣線加樣量不超過1 μl，相當(dāng)于60μg~80μg的蛋白質(zhì)。但糖蛋白和脂蛋白電泳時，加樣量則應(yīng)多些。對每種樣品加樣量均應(yīng)先作預(yù)實驗加以選擇。點樣好壞是獲得理想圖譜的重要環(huán)節(jié)之一，以印章法加樣時，動作應(yīng)輕、穩(wěn)，用力不能太重，以免將薄膜弄壞或印出凹陷而影響電泳區(qū)帶分離效果。

電量的選擇
電泳過程應(yīng)選擇合適的電流強度，一般電流強度為0.4 mA/cm~0.5 mA/cm寬膜為宜。電流強度高，尤其在溫度較高的環(huán)境中，可引起蛋白質(zhì)變性或由于熱效應(yīng)引起緩沖液中水分蒸發(fā)，使緩沖液濃度增加，造成膜片干涸。電流過低，則樣品泳動速度慢且易擴散。

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