動物臟器粉末吸收法
常用肝粉(豬、大白鼠或小白鼠),其次是骨髓粉、鼠腦粉和雞胚粉等。每毫升熒光抗體中加入肝粉50~100mg,在離心管中充分混勻,在室溫中振動2h,4℃中過夜,再攪拌10min,高速離心(3000~15000r/min)30min,1~2次后,即可使用其上清液。吸收一般應在臨用前進行,吸收后之熒光抗體保存冰箱中勿超過2周。染色應作吸收前后之比較,吸收時可先用緩沖鹽水將組織干粉浸濕,離心(3000~15000r/min)30min,除去上清液,再加入熒光抗體進行吸收,以免消耗過多的抗體。
肝粉或新鮮細胞吸收是一種非特異性的消除方法,對熒光抗體的熒光色素和蛋白都有吸附作用。如檢查組織中的病毒抗原時,也可用相同的組織干粉或勻漿沉淀物吸收之。
用臟器肝粉吸收對熒光抗體損失較多,如果根據(jù)Hiramotos氏等的方法將組織的20%生理鹽水勻漿液,用生理鹽水洗2~3次,12000r/min
10min離心沉淀,用其沉淀物吸收其熒光抗體即能*達到目的,京極方久氏認為這樣吸收對熒光抗體幾乎沒有損失,他們常用此法,效果甚佳,吸收后放置一周左右,用時有必要再吸收一次。
【肝粉的制法】
(1)將若干只小白鼠或大白鼠放血殺死,取出肝臟,用生理鹽水洗2~3次,除去血液,剝掉表面的結締組織的脂肪。
(2)剪碎,用生理鹽水反復洗滌至無血色止,然后再加生理鹽水少許,用組織搗碎機或勻漿器作成勻漿。
(3)將肝勻漿裝入離心管內(1/3左右),交換地用2~3倍量生理鹽水和丙酮反復洗滌各三次,至上清無血色止,每次完畢先用2000r/min離心沉淀15 min后,再除去上清液。
(4)zui后用丙酮洗滌肝漿,再用布氏漏斗過濾,或離心沉淀,將沉淀物平鋪在潔凈的玻璃板上,37℃烤干(過夜)。
(5)在乳缽中充分研磨,用120目銅篩篩選過后,分裝,密封,低溫干燥保存。