親和組織化學(xué)法
? 是以一種物質(zhì)對某種組織成分具有高度親合力為基礎(chǔ)。
? 這種方法敏感性更高,有利于微量抗原(抗體)在細(xì)胞或亞細(xì)胞水平的定位。
*—抗*染色法
【原理】
? *(biotin)又稱維生素H,是一種小分子維生素,分子量為244,是轉(zhuǎn)氨甲?;^程中的輔酶。
? 抗*(avidin),又稱卵白素或親和素,是一種分子量為67000的堿性蛋白,對*具有很強(qiáng)的親和力,比抗原抗體間的親和力要高出100萬倍。它由4個(gè)亞基組成,每個(gè)亞基都有*的結(jié)合位點(diǎn)。
? 兩者均可與抗體等大分子生物活性物質(zhì)相偶聯(lián),又可被酶類等多種示蹤物所標(biāo)記,形成*-抗*系統(tǒng)。
– 該系統(tǒng)一端偶聯(lián)大分子生物反應(yīng)體系,另一端連結(jié)標(biāo)記物,后者加入酶的底物,產(chǎn)生顏色反應(yīng)。
(1)標(biāo)記抗*—*法(labelled avidin-biotin method, LAB):分為直接法和間接法。
? 直接法
用*標(biāo)記*抗體,與抗原結(jié)合;酶標(biāo)記抗*,與*結(jié)合,然后進(jìn)行酶呈色反應(yīng)。
? 間接法
用*標(biāo)記二抗,酶標(biāo)記抗*,先用*抗體與組織抗原結(jié)合,再將第二抗體與*抗體相連結(jié),zui后進(jìn)行呈色反應(yīng)。
(2)橋抗*一*法(bridge avidin-biotin method,BRAB)
– 此法是用*分別標(biāo)記抗體和酶,以抗*為橋,把二者連接起來,進(jìn)行呈色反應(yīng)。
(3) 抗*-*-過氧化物酶法