熒光強(qiáng)度:熒光強(qiáng)度(fluorescence intensity)是指熒光色素發(fā)射熒光的光量子數(shù),決定熒光色素檢測的靈敏度。在一定范圍內(nèi),激發(fā)光越強(qiáng).熒光也越強(qiáng),即熒光強(qiáng)度等于吸收光強(qiáng)度乘以熒光效率。所以,選用適當(dāng)強(qiáng)度的光源作為激發(fā)光源和選用適合于被檢熒光物質(zhì)選擇性吸收的光譜濾片作為激發(fā)濾片,是提高熒光強(qiáng)度的根本方法。ELISA試劑盒
熒光物質(zhì)的吸收光譜和發(fā)射光譜:每種熒光物質(zhì)的吸收光不僅有一定波長。而且在各波長上的吸收量也不同,從而構(gòu)成特殊的吸收光譜曲線;發(fā)射熒光的情況也是如此。因此,熒光物質(zhì)在一定條件下有一定的吸收光譜(激發(fā)光譜)和發(fā)射光譜(熒光光譜),如吖啶橙的吸收光譜(zui大吸收波長)是455nm,其發(fā)射波長光譜為450~700nm。因此,吖啶橙與不同細(xì)胞成分結(jié)合后??僧a(chǎn)生橙、黃、紅、綠等熒光。了解各種熒光染料的吸收光譜和發(fā)射光譜,有利于在觀察被檢標(biāo)本時(shí),有效地選擇適當(dāng)?shù)臑V片,獲得的熒光效果。ELISA試劑盒
熒光穩(wěn)定性:提高激發(fā)光強(qiáng)度固然可以提高熒光強(qiáng)度,但激發(fā)光強(qiáng)度不可能無限提高。因?yàn)榧ぐl(fā)光強(qiáng)度超過一定限度時(shí)光吸收趨于飽和,而且不可逆地破壞激發(fā)態(tài)分子,這種現(xiàn)象稱光漂白。對于熒光顯微鏡和激光共聚焦顯微鏡而言,如光源長時(shí)間照射樣品??蓪?dǎo)致光漂白現(xiàn)象,嚴(yán)重影響檢測。解決光漂白問題zui直接的方法:一是降低光照強(qiáng)度,二是使用抗淬滅劑(anti-fade reagent)。ELISA試劑盒