免疫組織化學(xué)(immunohistochemistry)又稱免疫細(xì)胞化學(xué)(immunocytochemistry),是指帶顯色劑標(biāo)記的特異性抗體在組織細(xì)胞原位通過抗原抗體反應(yīng)和組織化學(xué)的呈色反應(yīng),對(duì)相應(yīng)抗原進(jìn)行定性、定位、定量測(cè)定的一項(xiàng)技術(shù)。
1.基本原理
抗體和抗原之間的結(jié)合具有高度的特異性,免疫組織化學(xué)正是利用了這一原理。先將組織或細(xì)胞中的某種化學(xué)物質(zhì)提取出來,以此作為抗原或半抗原,通過免疫動(dòng)物后獲得特異性的抗體,再以此抗體去探測(cè)組織或細(xì)胞中的同類的抗原物質(zhì)。由于抗原與抗體的復(fù)合物是無色的,因此還必須借助于組織化學(xué)的方法將抗原抗體結(jié)合的部位顯示出來,以其達(dá)到對(duì)組織或細(xì)胞中的未知抗原進(jìn)行定性,定位或定量的研究。
2.幾種常用的免疫組織化學(xué)方法的原理
免疫熒光細(xì)胞化學(xué)技術(shù)
將已知抗體標(biāo)上熒光素,以此作為探針檢查細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原,在熒光顯微鏡下觀察.當(dāng)抗原抗體復(fù)合物中的熒光素受激發(fā)光的照射后會(huì)發(fā)出一定波長(zhǎng)的熒光,從而可以確定組織中的抗原定位或定量.
免疫酶細(xì)胞化學(xué)
是目前免疫組織化學(xué)研究中zui常用的技術(shù).基本原理是先以酶標(biāo)記的抗體與組織或細(xì)胞作用,然后加入酶的底物,生成有色的不溶性產(chǎn)物或具有一定電子密度的顆粒,通過光鏡或電鏡,對(duì)細(xì)胞或組織內(nèi)的相應(yīng)抗原進(jìn)行定位或定性研究.
免疫膠體金技術(shù)
就是用膠體金標(biāo)記一抗,二抗或其他的能特異性的結(jié)合免疫球蛋白的分子(如葡萄球菌A蛋白)等作為探針,對(duì)組織或細(xì)胞內(nèi)的抗原進(jìn)行定性,定位或定量研究.由于膠體金的電子密度高,多用于免疫電鏡的單標(biāo)記或多標(biāo)記的定位研究.
免疫組織化學(xué)的全過程包括:①抗原的提取與純化;③免疫動(dòng)物或細(xì)胞融合,制備特異性抗體以及抗體的純化;③將顯色劑與抗體結(jié)合形成標(biāo)記抗體;④標(biāo)本的制備;③免疫細(xì)胞化學(xué)反應(yīng)以及呈色反應(yīng);⑧觀察結(jié)果。