Bordelli氏法：取干凈的小試管（8×60mm）塞上棉塞，滅菌。用滅菌的脫脂牛乳洗脫試管斜面上的菌苔，制成濃厚菌懸液。然后用無菌吸管將菌懸液滴入小試管底部。每管一滴，然后轉(zhuǎn)動小試管使菌液分散在試管底部的壁上。標(biāo)記菌名。將小試管裝在15×150mm的試管中，在大試管底部事先裝上1.5cm高的（P2O5或KOH），管口用帶玻璃管的橡皮塞塞緊，蠟封。將大試管與真空泵連通，抽真空至0.1～0.2mm汞柱時，將玻璃管熔封，置室溫暗處或冰箱保存。ELISA試劑盒

儀器與材料

1、斜面菌種：絲狀真菌、酵母菌、芽孢桿菌和無芽孢桿菌各一支。

2、接種用具一套。

3、滅菌物品：1ml、5ml吸管，長滴管，安瓶管，9ml無菌水試管，砂土管，液體石蠟，脫脂牛乳。其中，液體石蠟的處理為1.5kg/cm2壓力滅菌1小時或1kg/cm2壓力滅菌3次，每次30分鐘。接著檢查是否*無菌，即接入肉湯中檢查有無雜菌生長。zui后放在60～80℃轟烤以去除水分。脫脂牛乳的處理為2000rpm離心10分鐘脫脂，然后0.5kg/cm2壓力滅菌20分鐘，或間歇滅菌3次，經(jīng)檢查無菌后備用。ELISA試劑盒

4、P2O5，無水CaCl2各一瓶。

5、真空干燥器，真空泵。

方法

1、液體石蠟覆蓋法：取待保存的菌種斜面，用5ml無菌吸管向內(nèi)加入滅菌石蠟，要求液體石蠟高出菌斜面1cm左右，若不夠此高度，則常會引起斜面抽干現(xiàn)象。

2、砂土管法：用1ml無菌吸管吸取0.2～0.5ml菌懸液，滴入砂土管中，充分混勻后，將砂土管放入真空干燥器內(nèi)，抽干，真空干燥器內(nèi)需放置無水CaCl2。zui后，將干燥好的砂土管取出，迅速于火焰上蠟封管口，并在室溫下或冰箱中進(jìn)行保存。ELISA試劑盒