五聚體(ProImmune)結(jié)合胞內(nèi)細(xì)胞因子染色在國外正在成為很多實(shí)驗(yàn)室的常規(guī)實(shí)驗(yàn)。五聚體可用于檢測和分離少至淋巴細(xì)胞0.02%的抗原特異性CD8+T細(xì)胞群。然而，并不是所有的抗原特異性T細(xì)胞都具有功能，功能性細(xì)胞的比例因個體和疾病不同而異?？梢酝ㄟ^對另外的胞內(nèi)細(xì)胞因子聯(lián)合染色來研究抗原特異性T細(xì)胞的免疫效應(yīng)功能。

    細(xì)胞因子的產(chǎn)生對免疫反應(yīng)起著重要的作用。細(xì)胞因子作用的范例包括干擾素-γ（IFNγ）誘導(dǎo)產(chǎn)生的許多抗病毒蛋白、IL-2誘導(dǎo)產(chǎn)生的T細(xì)胞增殖、以及腫瘤壞死因子α（TNFα）對病毒基因表達(dá)和復(fù)制的抑制。細(xì)胞因子不是預(yù)先形成的，而是在受到相關(guān)刺激時才迅速產(chǎn)生和分泌的。因此，胞內(nèi)細(xì)胞因子的染色依賴于在蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑存在的情況下（以將細(xì)胞因子截留在細(xì)胞內(nèi)）對細(xì)胞的刺激。

    激起細(xì)胞因子產(chǎn)生的細(xì)胞活化一般會導(dǎo)致T細(xì)胞受體的下調(diào)。因此，如果需要同時檢測T細(xì)胞特異性，則應(yīng)在細(xì)胞活化前進(jìn)行Pro5R五聚體染色以確保染色水平。在此期間五聚體可能會與T細(xì)胞受體一同被內(nèi)化，但仍可以在透化細(xì)胞內(nèi)檢測到。研究抗原特異性T細(xì)胞的效應(yīng)功能時，先將細(xì)胞以五聚體染色，然后再用抗原刺激，隨后用針對細(xì)胞外表位（如CD8）的特異性抗體進(jìn)行染色，zui后再進(jìn)行膜透化和胞內(nèi)細(xì)胞因子染色。

    Pro5R五聚體的胞內(nèi)細(xì)胞因子染色使研究者能夠測定對一個抗原刺激產(chǎn)生功能性應(yīng)答的抗原特異性CD8+T細(xì)胞的比例。這在對特定免疫應(yīng)答的監(jiān)測和對不同疾病的反應(yīng)之基本差異的了解方面都有影響意義。