在金標(biāo)檢測(cè)試劑盒中，進(jìn)行各項(xiàng)實(shí)驗(yàn)條件的選擇是很首要的，其間包括:
(1) 固相載體的選擇：很多物質(zhì)可作為固相載體，如聚氯乙烯、聚苯乙烯、聚丙酰胺和纖維素等。其方式可所以凹孔平板、試管、珠粒等。如今常用的是40孔聚苯乙烯凹孔板。不管何種載體，在運(yùn)用前均可進(jìn)行選擇：用等量抗原包被，在同一實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行反應(yīng)，查詢其顯色反應(yīng)是不是均一性，據(jù)此判明其吸附功能是不是出色。
(2) 包被抗體(或抗原)的選擇：金標(biāo)檢測(cè)試劑盒將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時(shí)，懇求純度要好,吸附時(shí)通常懇求PH在9.0～9.6之間。吸附溫度，時(shí)間及其蛋白量也有一定影響,通常多選用4℃ 18～24小時(shí)。蛋白質(zhì)包被的zui適濃度需進(jìn)行滴定：即用不一樣的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后，在其它實(shí)驗(yàn)條件相一同，查詢陽(yáng)性標(biāo)本的OD值。選擇OD值而蛋白量zui少的濃度。對(duì)于大都蛋白質(zhì)來(lái)說(shuō)通常為1～10μg/ml。
(3) 酶符號(hào)抗體工作濃度的選擇：首先用直接ELISA法進(jìn)行開(kāi)始效價(jià)的滴定(見(jiàn)酶符號(hào)抗體部份)。然后再固定其它條件或采用“方陣法”(包被物、待檢樣品的參看品及酶符號(hào)抗體分別為不一樣的稀釋度)在正式實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)里地滴定其工作濃度。
(4) 金標(biāo)檢測(cè)試劑盒酶的底物及供氫體的選擇：對(duì)供氫體的選擇懇求是價(jià)廉、安全、有明顯地顯色反應(yīng)，而本身無(wú)色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用，應(yīng)留心防護(hù)。有條件者應(yīng)運(yùn)用不致癌、靈敏度高的供氫體，如TMB和ABTS是如今較為滿足的供氫體。底物作用一段時(shí)間后，應(yīng)參與強(qiáng)酸或強(qiáng)堿以中止反應(yīng)。通常底物作用時(shí)間，以10-30分鐘為宜。底物運(yùn)用液有必要新鮮制造，尤其是H2O2在臨用前參與。