人直腸平滑肌細(xì)胞

2.組織來源：直腸組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶

4.細(xì)胞簡介：

人直腸平滑肌細(xì)胞分離自直腸組織；直腸為大腸的未段，位于小骨盆內(nèi)。上端平第3骶椎處接續(xù)乙狀結(jié)腸，沿骶骨和尾骨的前面下行，穿過盆膈，下端以肛而終。直腸上端的大小似結(jié)腸，其下端擴(kuò)大成直腸壺腹，是糞便排出前的暫存部位，最下端變細(xì)接肛管。直腸在盆腔內(nèi)的位置與骶椎腹面關(guān)系密切，與骶椎有相同的曲度。直腸周圍多脂肪、無縱帶，位于膀胱和生殖器官的背側(cè)。直腸平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長特點(diǎn)。直腸的動(dòng)脈血供主要是來自腸系膜下動(dòng)脈的直腸上動(dòng)脈，來自髂內(nèi)動(dòng)脈的直腸中動(dòng)脈和來自髂內(nèi)動(dòng)脈的直腸下動(dòng)脈。平滑肌收縮是胃腸蠕動(dòng)中基本的運(yùn)動(dòng)方式；腸炎時(shí)由于平滑肌特殊肌動(dòng)蛋白的增加導(dǎo)致了平滑肌層的增厚。平滑肌肌動(dòng)蛋白可能影響收縮力的產(chǎn)生，這進(jìn)一步證明了炎癥時(shí)的腸平滑肌細(xì)胞具有可塑性。利用腸平滑肌細(xì)胞的培養(yǎng)，可以幫助了解收縮、增殖和胃腸道結(jié)締組織對平滑肌細(xì)胞的反應(yīng)。

5.方法簡介：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人直腸平滑肌細(xì)胞采用yi蛋白酶-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實(shí)驗(yàn)室分離的人直腸平滑肌細(xì)胞經(jīng)α-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

注意事項(xiàng)：

1、收到細(xì)胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2、收到細(xì)胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)（視細(xì)胞密度而定）穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況，并對細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照（建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷售依據(jù)。

3、由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?，故本公司只保證客戶收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài)，故客戶需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時(shí)間證明，期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4、所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺(tái)內(nèi)操作，并請注意防護(hù)，所有廢液及接觸過此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細(xì)胞（貼壁細(xì)胞消化下來離心，懸浮細(xì)胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時(shí)間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細(xì)胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長期保存

在沒有凍存盒或者非程序凍存液時(shí)，可以選擇手動(dòng)梯度降溫。但手動(dòng)梯度降溫不適用于所有細(xì)胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測試。

細(xì)胞處理：

1）凍存細(xì)胞的復(fù)蘇：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2）細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)70%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。該細(xì)胞為懸浮和輕微的貼壁細(xì)胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細(xì)胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。由于細(xì)胞貼壁不牢PBS潤洗后細(xì)胞會(huì)脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間），然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細(xì)胞、pbs清洗液中的細(xì)胞和消化下來的貼壁細(xì)胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細(xì)胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3）細(xì)胞凍存:收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。下面T25瓶為例：

1、細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)，來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲(chǔ)存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人輸尿管上皮細(xì)胞

小鼠前列腺干細(xì)胞

小鼠三叉神經(jīng)元細(xì)胞

小鼠腎上腺皮質(zhì)細(xì)胞

小鼠視乳頭星形膠質(zhì)細(xì)胞

小鼠外周血單個(gè)核細(xì)胞

小鼠下腔靜脈內(nèi)皮細(xì)胞

小鼠心臟干細(xì)胞

小鼠血管外膜成纖維細(xì)胞

小鼠胰腺導(dǎo)管上皮細(xì)胞

小鼠支氣管上皮細(xì)胞

小鼠滋養(yǎng)層干細(xì)胞

豬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞

293FT (人胚腎細(xì)胞)

4647 (長尾綠猴腎細(xì)胞)

人可溶性前體蛋白α(sAPPα)試劑盒ELISA

人橫紋肌輔肌動(dòng)蛋白α(smActinin-α)試劑盒ELISA

人抗磷脂酰suan抗體(IgG)ELISA檢測試劑盒

人1,25二羥基D3(1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3)ELISA檢測試劑盒

柏氏血矛線蟲PCR試劑盒

對蝦桿狀病毒PCR試劑盒

西部馬腦脊髓炎病毒PCR檢測試劑盒

無綠藻通用PCR檢測試劑盒

畸形線蟲PCR試劑盒

肉毒梭狀芽孢桿菌B型外毒su基因PCR試劑盒

飾紋汀蛙虹彩病毒PCR試劑盒

人直腸平滑肌細(xì)胞寄生曲霉PCR檢測試劑盒

極細(xì)密螺旋體PCR試劑盒

十二指腸鉤口線蟲PCR檢測試劑盒

巴西果仁PCR檢測試劑盒