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規(guī)格	5×105Cells/T25培養(yǎng)瓶	組織來源	椎間盤組織
貨號	CS-X3198	細胞形態(tài)	梭形、多角形

產(chǎn)品信息：

貨號	CS-X3198	組織來源	椎間盤組織
傳代特性	可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)	培養(yǎng)基	含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
細胞形態(tài)	梭形、多角形	生長特性	貼壁
培養(yǎng)條件	氣相：空氣，95%；CO2，5%	換液頻率	每3-4天換液一次

人退行性椎間盤髓核細胞

商品介紹：

產(chǎn)品名稱：人退行性椎間盤髓核細胞
2.組織來源：椎間盤組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人退行性椎間盤髓核細胞分離退行性椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，分為中央部的髓核，富于彈性的膠狀物質(zhì)；周圍部的纖維環(huán)，由多層纖維軟骨環(huán)按同心圓排列。上下有軟骨板，是透明軟骨復(fù)蓋于椎體上，下面骺環(huán)中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環(huán)一起將髓核密封起來。纖維環(huán)由膠原纖維束的纖維軟骨構(gòu)成，位于髓核的四周。纖維環(huán)的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環(huán)成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉(zhuǎn)負荷。髓核，是乳白色半透明膠狀體，富于彈性，為椎間盤結(jié)構(gòu)的一部分，位于兩軟骨板與纖維環(huán)之間。由縱橫交錯的纖維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)即軟骨細胞和蛋白多糖黏液樣基質(zhì)構(gòu)成的彈性膠凍物質(zhì)。嬰幼兒時期的髓核含水量為80%-90%，即使到了老年，其含水量也在70%上下。髓核在出生時體積大而松散，位于椎間盤的中央，至成年時位置移至椎間盤的中后部；在成年以前構(gòu)成髓核的主要物質(zhì)是大量蛋白多糖復(fù)合體、膠原纖維和纖維軟骨，隨著年齡的增長，髓核中的蛋白多糖解聚增多，水分逐漸減少，膠原增粗并逐漸被纖維軟骨所替代。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人退行性椎間盤髓核細胞采用膠原酶-中性dan白酶混合消化法并結(jié)合軟骨細胞專用培養(yǎng)基培養(yǎng)篩選制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人退行性椎間盤髓核細胞經(jīng)Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率每3-4天換液一次

生長特性貼壁

細胞形態(tài) 梭形、多角形

傳代特性可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞保存方法：

（一）細胞凍存

1. 配制含10%DMSO或甘油、10～20%小牛血清的凍存培養(yǎng)液；

2. 取對數(shù)生長期的細胞，去除舊培養(yǎng)液，用PBS清洗。

3. 去除PBS，加入適量（覆蓋培養(yǎng)皿表面）把單層生長的細胞消化下來；

4. 離心1000rpm，5min；

5. 去除，加入適量配制好的凍存培養(yǎng)液，用吸管輕輕吹打使細胞均勻，計數(shù)，調(diào)節(jié)凍存液中細胞的最終密度為5×106/ml～1×107/ml；

6. 將細胞分裝入凍存管中，每管1～1.5 ml；

7. 在凍存管上標明細胞的名稱，凍存時間及操作者；

8. 凍存：標準的凍存程序為降溫速率-1～-2℃/ min；當溫度達-25℃以下時，可增至-5℃～-10℃/min；到-100℃時，則可迅速浸入液氮中。也可將裝有細胞的凍存管放入-20℃冰箱2h ，然后放入-70℃冰箱中過夜，取出凍存管，移入液氮容器內(nèi)。

人退行性椎間盤髓核細胞

注意事項：

1）、欲冷凍保存之細胞應(yīng)在生長良好且存活率高之狀態(tài)，約為80～90%致密度。冷凍前檢測細胞是否仍保有其性質(zhì)，應(yīng)在冷凍保存前一至二日測試是否有抗體之產(chǎn)生。

2）、細胞在液氮中可長期凍存無，而不會影響細胞活力;在-70度可保存數(shù)月。

3）、注意冷凍保護劑之品質(zhì)。DMSO應(yīng)為試劑級等級，無菌且無色(以0. 22micron FGLP Telflon過濾或是直接購買無菌產(chǎn)品，如Sigma D-2650)，以5～10 ml小體積分裝，4 ℃避光保存，勿作多次解凍。Glycerol亦應(yīng)為試劑級等級，以高壓蒸汽滅菌后避光保存。在開啟后一年內(nèi)使用，因長期儲存后對細胞會有毒性。本方法中先制備雙倍凍存液，可避免DMSO直接加入時釋放的熱量對細胞的損傷。緩慢逐滴加入細胞懸液是使細胞逐步適應(yīng)高滲，可降低細胞受損。DMSO可能引起部分白血病細胞株的分化，可換用10%甘油凍存。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠外周血單核細胞	人庚型肝炎病毒(HGV)抗原試劑盒ELISA
BT-549 (人乳腺管癌細胞)	人肌球蛋白輕鏈(MLC)試劑盒ELISA
C6/36 [Clone C6/36] (蚊子細胞)	人動力蛋白輕鏈1,細胞質(zhì)(DYNLL1/DLC1/DNCL1/DNCLC1/HDLC1)ELISA檢測試劑盒
CAL 27 (人舌鱗癌細胞)	人Rho關(guān)聯(lián)含卷曲螺旋蛋白激mei2(Rock-2)ELISA檢測試劑盒
CCRF-CEM [CCRF CEM] (人急性淋巴細胞白血病T淋巴細胞)	人乳頭瘤病毒52b PCR試劑盒
CNE-2Z (人鼻咽癌細胞)	半邊蓮染料法PCR鑒定試劑盒
CT26.WT (小鼠結(jié)腸癌細胞)	乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒
Daudi (人Burkitt's淋巴瘤細胞)	蠶微粒子病PCR檢測試劑盒
E.G7-OVA (小鼠T淋巴瘤細胞)	輪狀病毒A群RT-PCR試劑盒
ES-2 (人卵巢透明細胞癌細胞)	青枯雷爾氏菌PCR試劑盒
G-401 (人腎癌Wilms細胞)	禽腺病毒C種4型(FADV-C-4)核suan檢測試劑盒
HBZY-1 (大鼠腎小球系膜細胞)	螺桿菌通用PCR試劑盒
H-4-II-E-C3 [H4-II-E-C3] (大鼠肝癌細胞)	人退行性椎間盤髓核細胞流行性乙型腦炎病毒PCR檢測試劑盒
HCT-15 (人結(jié)直腸腺癌細胞)	禽皰疹病毒1型PCR試劑盒
Hep 3B2.1-7 (人肝癌細胞)	豬布氏桿菌PCR檢測試劑盒

操作步驟：

1）、冷凍前24-48小時更換半量或全量培養(yǎng)基，使細胞處于指數(shù)生長期。

2）、配制冷凍保存溶液(使用前配制)：另取一離心管，加入培養(yǎng)基、血清，逐滴加入二甲基亞砜 (DMSO)至20%濃度，即制成雙倍的凍存液，置于室溫下待用。

3）、離心收集培養(yǎng)之細胞，用加血清的培養(yǎng)基重懸起細胞，取少量細胞懸浮液(約0. 1 ml)計數(shù)細胞濃度及凍前存活率。

4）、取與細胞懸液等量的凍存液，緩慢逐滴加入細胞懸液，并晃動試管，制成細胞凍存懸液(DMSO后濃度為5～10%)，使細胞濃度為1～5×106cells/ ml，混合均勻，分裝于已標示之冷凍保存管中，1～2 ml/vial，并取少量細胞懸浮液作污染檢測。嚴密封口后，注明細胞名稱、代數(shù)、日期。然后進行凍存。