細(xì)胞膜紅色熒光探針(DiI)

商品介紹：

本探針是的細(xì)胞膜熒光探針之一，呈現(xiàn)橙紅色熒光。DiI是一種親脂性膜染料，進(jìn)入細(xì)胞膜后可以側(cè)向擴(kuò)散逐漸使整個細(xì)胞的細(xì)胞膜被染色。DiI在進(jìn)入細(xì)胞膜之前熒光非常弱，僅當(dāng)進(jìn)入到細(xì)胞膜后才可以被激發(fā)出很強的熒光。DiI被激發(fā)后可以發(fā)出橙紅色的熒光，DiI和磷酯雙層膜結(jié)合后的激發(fā)光譜和發(fā)射光譜參考下圖。其中，大激發(fā)波長為549nm，大發(fā)射波長為565nm。

商品屬性：

分子式：C59H97ClN2O4

分子量：933.88

CAS：41085-99-8。

DiI可以溶解于無水乙醇、DMSO和DMF，溶解度約為1-2.5mg/ml。發(fā)現(xiàn)較難溶解時可以適當(dāng)加熱，并用超聲處理以促進(jìn)溶解。

DiI被廣泛用于正向或逆向的，活的或固定的神經(jīng)等細(xì)胞或組織的示蹤劑或長期示蹤劑。DiI通常不會影響細(xì)胞的生存力。被DiI標(biāo)記的神經(jīng)細(xì)胞在體外培養(yǎng)的條件下可以存活長達(dá)4周，在體內(nèi)可以長達(dá)一年。DiI在經(jīng)過固定的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的遷移速率為0.2-0.6mm/day，在活的神經(jīng)元細(xì)胞膜上的的遷移速率為6mm/day。

DiI除了簡單的細(xì)胞膜熒光標(biāo)記外，還可以用于檢測細(xì)胞的融合和粘附，檢測發(fā)育或移植過程中細(xì)胞遷移，通過FRAP檢測脂在細(xì)胞膜上的擴(kuò)散，檢測細(xì)胞毒性和標(biāo)記脂蛋白等。

用于細(xì)胞膜熒光標(biāo)記時，DiI的常用濃度為1-25μM，的濃度為5-10μM。DiI可以直接染色活的細(xì)胞或組織，染色時間通常為5-20分鐘。對于固定的細(xì)胞或組織，通常宜使用配制在PBS中的4%多聚進(jìn)行固定，使用其它不適當(dāng)?shù)墓潭ㄒ簳?dǎo)致熒光背景較高。

注意事項：熒光染料均存在淬滅問題，請盡量注意避光，以減緩熒光淬滅。

儲存條件：4℃避光，有效期一年。

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實驗環(huán)境：?確保實驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：