Hoechst33258染色試劑盒細(xì)胞組織染色

商品介紹：

細(xì)胞凋亡時產(chǎn)生顯著的變化是染色體固縮，DNA 裂解使細(xì)胞核形態(tài)產(chǎn)發(fā)生變化。本試劑盒提供的熒光染料Hoechst 33258 是一種無毒、水溶性雙苯咪唑類化合物，可作為熒光探針與DNA 分子結(jié)合。

商品屬性：

在凋亡細(xì)胞中，細(xì)胞膜對Hoechst 33258 的攝取增高，并且由于染色體高度濃縮，Hoechst 33258 與之結(jié)合增強(qiáng)，染色呈強(qiáng)藍(lán)色熒光，而正常細(xì)胞只呈微弱熒光，死細(xì)胞則不被染色，由此可檢測出凋亡。

操作方法

1. 用適當(dāng)?shù)姆椒ㄕT導(dǎo)細(xì)胞凋亡；

2. 用冷Buffer A 洗滌細(xì)胞二次，離心收集106 細(xì)胞于1.5mL 微量離心管中；（貼壁細(xì)胞原位固定染色）

3. 加入1mL 的4%溶液(用戶自備)，4℃固定細(xì)胞10min；

4. 離心去固定液，用Buffer A 洗兩遍；離心后留50～100μL Buffer A 重懸細(xì)胞；

5. 取上步驟50～100μL 細(xì)胞懸液涂片，自然晾干；

6. 滴加100μL Hoechst 33258 工作液（備注1），室溫染色10 min，水沖凈晾干；

7. 以紫外光340nm 波長激發(fā)，熒光顯微鏡下觀察。

儲存：2-8℃，避光，有效期一年。

步驟和注意事項：?

準(zhǔn)備實(shí)驗環(huán)境：?確保實(shí)驗區(qū)域清潔，?使用酒精清潔計數(shù)板和蓋玻片，?然后用吸水紙輕輕擦干。?

細(xì)胞培養(yǎng)：?

準(zhǔn)備試管或培養(yǎng)皿、?細(xì)胞培養(yǎng)基和待培養(yǎng)的細(xì)胞。?

取出保存于低溫下的細(xì)胞苗，?并加入培養(yǎng)基中，?搖晃混合均勻。?

用移液管將細(xì)胞培養(yǎng)基和細(xì)胞種植在試管或培養(yǎng)皿中。?

將試管或培養(yǎng)皿放置于恒溫培養(yǎng)箱中，?定期更換培養(yǎng)液。?

細(xì)胞凍存與復(fù)蘇：?

細(xì)胞系的凍存是將生長較好的傳代細(xì)胞懸浮在加有冷凍保護(hù)劑的溶液中，?以一定的冷凍速率降至零下某一溫度，?并在此溫度下對其長期保存的過程。?

復(fù)蘇則是將凍存的細(xì)胞系恢復(fù)到常溫的過程，?原則是“慢凍快融"，?以較大限度地保存細(xì)胞活力。?

細(xì)胞計數(shù)：?

制備細(xì)胞懸液，?使用消化單層培養(yǎng)細(xì)胞或收集懸浮培養(yǎng)細(xì)胞，?制成單個細(xì)胞懸液。?

在顯微鏡下，?用10×物鏡觀察計數(shù)板四角大方格中的細(xì)胞數(shù)，?細(xì)胞壓中線時，?只計左側(cè)和上方者，?不計右側(cè)和下方者。?

熒光顯微鏡使用：?

使用熒光染料對細(xì)胞進(jìn)行染色，?并觀察細(xì)胞所發(fā)出的熒光信號，?以研究細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能。?

聚合酶鏈反應(yīng)（?PCR）?：?

準(zhǔn)備PCR反應(yīng)所需的DNA模板、?引物、?聚合酶和核苷酸。?

按照PCR反應(yīng)液配制表制備反應(yīng)液。?

在反應(yīng)器中加入反應(yīng)液，?開始PCR反應(yīng)。?

PCR反應(yīng)的成功與否，?可以通過電泳、?測序等方法進(jìn)一步確認(rèn)。?

轉(zhuǎn)染：?

準(zhǔn)備轉(zhuǎn)染所需的載體DNA和細(xì)胞。?

制備轉(zhuǎn)染試劑，?將DNA載體溶解于轉(zhuǎn)染試劑中，?與細(xì)胞混合均勻。?

處理轉(zhuǎn)染細(xì)胞，?并進(jìn)行下一步實(shí)驗。?

在操作過程中，?應(yīng)注意實(shí)驗室安全規(guī)范，?避免隨意丟棄垃圾，?及時登記購買耗材或試劑，?保持實(shí)驗環(huán)境的清潔和安全

下列是公司正在出售的產(chǎn)品：