人心臟纖維原細胞

2.組織來源：心臟組織

3.產(chǎn)品規(guī)格：5×105cells/T25細胞培養(yǎng)瓶

4.細胞簡介：

人心臟纖維原細胞分離自心臟組織；心臟由心肌細胞和非心肌細胞組成，非心肌細胞占細胞總數(shù)的70%，其中90%以上的非心肌細胞由心肌成纖維細胞組成。纖維細胞是機能不活躍的成纖維細胞。胞體呈梭形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核小，染色深。電鏡下可見，細胞中粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)和高爾基體均不發(fā)達。當(dāng)組織受損時，纖維細胞可轉(zhuǎn)化為成纖維細胞而參與修復(fù)過程。纖維細胞和成纖維細胞是處于不同功能狀態(tài)的同一種細胞，如在組織損傷后的修復(fù)過程中，纖維細胞可轉(zhuǎn)化為功能活躍的成纖維細胞。纖維細胞較小，呈多角形，胞質(zhì)較少，弱嗜酸性，胞核亦較小，染色較深，電鏡下粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)較少，高爾基復(fù)合體不發(fā)達。成纖維細胞較大，呈星形或梭形，有突起，細胞核呈卵圓形，染色質(zhì)稀疏，染色淡，核仁明顯，胞質(zhì)較多。成纖維細胞能合成和分泌膠原蛋白、彈性蛋白和蛋白多糖，形成膠原纖維、彈性纖維和網(wǎng)狀纖維以及基質(zhì)成分。心肌成纖維細胞主要功能為對心肌細胞起結(jié)構(gòu)支持作用并負責(zé)細胞基質(zhì)外的合成，當(dāng)心肌損傷時能產(chǎn)生旁分泌生長因子。心肌成纖維細胞是心臟結(jié)締組織中常見的細胞，可合成和分泌膠原纖維、彈性纖維、網(wǎng)狀纖維及有機基質(zhì)，并且在外傷等因素刺激下，部分纖維細胞可重新轉(zhuǎn)變?yōu)橛字傻某衫w維細胞，其功能活動也得以恢復(fù)，參與組織損傷后的修復(fù)。因此，對心肌成纖維細胞的生理學(xué)研究成為現(xiàn)代心血管領(lǐng)域研究的一個重點。

5.方法簡介：

公司實驗室分離的人心臟纖維原細胞采用膠原酶消化結(jié)合差速貼壁法制備而來制備而來，細胞總量約為5×10?cells/瓶。

6.質(zhì)量檢測：

公司實驗室分離的人心臟纖維原細胞經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

7.培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率 每2-3天換液一次

生長特性 貼壁

細胞形態(tài) 成纖維細胞樣

傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液 0.25%yi蛋白酶

培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%

細胞處理：

1）凍存細胞的復(fù)蘇：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入到含4-6mL培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min，棄去上清液，培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶（或皿）中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2）細胞傳代：如果細胞密度達70%-90%，即可進行傳代培養(yǎng)。該細胞為懸浮和輕微的貼壁細胞，傳代可以參考以下方法：

1、收集：將培養(yǎng)瓶中的懸浮的細胞收集到離心管中。用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。由于細胞貼壁不牢PBS潤洗后細胞會脫落所以PBS也要回收到離心管中。

2、加入0.25％（w / v）0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中（T25瓶1-2mL，T75瓶2-3mL）置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘（難消化的細胞可以適當(dāng)延長消化時間），然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml含10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3、將收集到的懸浮細胞、pbs清洗液中的細胞和消化下來的貼壁細胞以1000rpml離心5min，棄去上清，補加1-2mL培養(yǎng)液后重懸混勻后將細胞懸液按1：2的比例分到新T25瓶中，添加6-8ml按照說明書要求配置的新的培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力，后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3）細胞凍存:收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。下面T25瓶為例：

1、細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中，可使用血球計數(shù)板計數(shù)，來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×10?~1×10?個活細胞/ml.

2、1000rpm離心3-5min，去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ，按每1ml凍存液含1×10?~1×10?個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中，標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3、將要凍存的細胞置于程序降溫盒中，-80度冰箱中過夜，之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

注意事項：

1、收到細胞后，若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染，請立即與我們聯(lián)系。

2、收到細胞先不開瓶蓋，瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時（視細胞密度而定）穩(wěn)定細胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況，并對細胞進行不同倍數(shù)拍照（建議收細胞時就整體外觀拍一張照片，觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況，隨后在顯微鏡下拍下細胞狀態(tài)，100*，200*各一張），觀察記錄細胞在運輸過程中是否有污染情況。作為我方進行銷售依據(jù)。

3、由于細胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊懀时竟局槐ＷC客戶收到細胞后一周內(nèi)的細胞狀態(tài)，故客戶需要售后時需出示收到細胞的時間證明及客戶提供收貨時間和發(fā)現(xiàn)問題后客服人員溝通的時間證明，期間間隔時間不能大于7天。

4、所有動物細胞均視為有潛在的生物危害性，必須在二級生物安全臺內(nèi)操作，并請注意防護，所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

操作步驟：

步驟1：從冰箱拿出無血清非程序凍存液，待用

步驟2：離心收集對數(shù)生長期的細胞（貼壁細胞消化下來離心，懸浮細胞直接離心，轉(zhuǎn)速1200rpm或250g，時間3min）

步驟3：棄上清，加入適量無血清非程序凍存液，重懸細胞

步驟4：按照1~1.5mL/管的量分裝到凍存管中，擰緊管蓋，做好標(biāo)記

步驟5：將凍存管直接移入-80℃冰箱中，24h后轉(zhuǎn)移至液氮長期保存

在沒有凍存盒或者非程序凍存液時，可以選擇手動梯度降溫。但手動梯度降溫不適用于所有細胞，且效果不穩(wěn)定，同樣需要先做凍存測試。

公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠下頜骨成纖維細胞

OV-90 (人卵巢癌細胞)

MIA PaCa-2 (人胰腺癌細胞)

TCCSUP (人膀胱癌細胞)

SW948 (人結(jié)腸腺癌細胞)

HT-3 (人子宮頸癌細胞)

NCI-H1437 (人肺癌細胞)

NCI-H1944 (人肺癌細胞)

SNU-719 (人胃癌細胞)

Hela 229 (人宮頸癌細胞)

NCI-H2126 (人肺癌細胞)

NCI-H647 (人肺癌細胞)

9L/lacZ (大鼠膠質(zhì)肉瘤細胞)

KYSE-150 (人食管鱗癌細胞)

NCCIT (人畸胎癌細胞)

人肥胖抑制su(Obestatin)檢測試劑盒

人脂阿拉伯甘露聚糖(LAM)檢測試劑盒

人次氧化mei試劑盒ELISA

人α1微球蛋白/bikunin前體(AMBP)ELISA檢測試劑盒

貝氏隱孢子蟲PCR試劑盒

羊巴貝斯蟲PCR檢測試劑盒

甲型流感病毒N亞型(IAV-N)核suan檢測試劑盒

副溶血性弧菌PCR檢測試劑盒

馬疥螨PCR試劑盒

禽傳染性支氣管炎病毒Delaware型RT-PCR試劑盒

禽傳染性支氣管炎病毒荷蘭株PCR檢測試劑盒

人心臟纖維原細胞馬虻PCR檢測試劑盒

馬節(jié)桿菌PCR檢測試劑盒

禽病毒性關(guān)節(jié)炎PCR檢測試劑盒

豬瘟病毒野毒株（CSFV-W）核suan檢測試劑盒