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P19-CAG-tTA-1F3細胞保存幾大步驟

時間:2018-5-4閱讀:980

 P19-CAG-tTA-1F3細胞保存幾大步驟

  1. P19-CAG-tTA-1F3細胞液體培養(yǎng)基的保存是冷藏好?還是冷凍好?

  要冷藏??!因為液體培養(yǎng)基經冷凍后再經溶化時,其溶液的pH值會發(fā)生改變,溶液往往變堿,某些成分溶解也會受到影響對細胞生長不利。故液體培養(yǎng)基一定要存放在冷藏箱中,通常液體培養(yǎng)基在冷藏條件下可存放6個月 ~ 一年。

  2.P19-CAG-tTA-1F3細胞 液體培養(yǎng)基中的作用,及使用方法。

  新wen速遞:讓細胞“百毒不侵”,人類基因組編寫計劃轉向設計“超安全”細胞。早在2016年,美國紐約大學的杰夫·博伊科、哈佛大學的喬治·邱奇、耶魯大學生物工程師法瑞恩·艾薩克等的科學家在美國《科學》雜志上刊文宣布,將籌資1億美元,啟動歷時10年的人類基因組編寫計劃(GP-write),從頭開始在實驗室中合成出人類基因組。消息一經發(fā)布,就引發(fā)了科學界和公眾對于實驗室“合成”出人類的強烈擔憂。但在歷時兩年的喧嘩與sao動后,該項目小組5月1日在波士頓宣布,將暫時放棄從頭制造人類基因組的嘗試,專注于編輯細胞以對抗病毒感染。
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  幾乎所有的細胞對有較高的要求,細胞需要合成蛋白質,在缺少時,細胞生長不良而死亡。所以,各種培養(yǎng)液中都含有較大量的。在溶液中很不穩(wěn)定,應置-20 ?C冰凍保存,用前加入培養(yǎng)基中。加有的液體培養(yǎng)基4 ?C 冰箱儲存兩周以上時,應重新加入原來量的。基礎醫(yī)學細胞中心在其服務項目中配制分裝了高濃度(100倍)的溶液(1ml/支)。每支1ml的加到99ml*培養(yǎng)基中,其終濃度為2mM/ml培養(yǎng)基。包裝為粉紅色,-24?C保存。

  3. P19-CAG-tTA-1F3細胞 培養(yǎng)用液pH對細胞生長的影響

  由于,大多數(shù)細胞適宜pH為7.2~7.4,偏離此范圍對細胞將產生有害的影響。各種細胞對pH的要求也不*相同,原代培養(yǎng)細胞一般對pH變動耐受差,無限細胞系耐受力強。

  但總體來說,細胞耐酸性比耐堿性強一些,偏酸環(huán)境中更利于細胞生長。因此,我們在配制培養(yǎng)用液時,可把液體的pH稍微調得偏酸一些。液體在經過0.10um或0.22um濾膜過濾時,溶液的pH還會向上浮動0.2左右。

  4.P19-CAG-tTA-1F3細胞 細胞傳代消化時所用濃度越高越好嗎?

  不見得!因為溶液的消化能力是和溶液的pH、溫度、濃度及溶液中是否含有Ca++, Mg++離子和血清等因素有關。通常情況下,pH 8.0 , 溫度 37 oC 其作用能力zui強。另外,鈣、鎂離子及血清均能大大降低其消化能力。我們每次進行傳代消化前,一定要用D-Hanks液或PBS液反復沖洗細胞培養(yǎng)瓶,以便于將含血清的培養(yǎng)基沖洗干凈,這樣就能大大提高消化液的消化能力。本中心通常使用的消化液濃度為:

 ?。?)0.05%+0.02%EDTA;

 ?。?)0.25%+0.03%EDTA。

 ?。?)0.25%

  溶液pH8.0~9.0;使用D-Hank液配制。

  多數(shù)細胞傳代消化可使用0.05%+0.02%EDTA這種消化液。 

  (編輯:tanxi)

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