人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）Elisa試劑盒說明書

人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）Elisa試劑盒僅供研究使用。

檢測范圍：48T  15pg/ml-400pg/ml

使用目的：本試劑盒用于測定人血清、血漿及相關(guān)液體樣本內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）含量。

實驗原理:本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標本中人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）水平。用純化的人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）抗體包被微孔板，制成固相抗體，往包被單抗的微孔中依次加入內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin），再與HRP 標記的內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）抗體結(jié)合，形成抗體-抗原-酶標抗體復(fù)合物，經(jīng)過*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB 在HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍色，并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）呈正相關(guān)。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），通過標準曲線計算樣品中人內(nèi)脂素/內(nèi)臟脂肪素（visfatin）濃度。

組成:

1 20 倍濃縮洗滌液20ml×1 瓶7 終止液3ml×1 瓶

2 酶標試劑3ml×1 瓶8 標準品（800pg/ml） 0.5ml×1 瓶

3 酶標包被板12 孔×4 條9 標準品稀釋液1.5ml×1 瓶

4 樣品稀釋液3ml×1 瓶10 說明書1 份

5 顯色劑A 液3ml×1 瓶11 封板膜2 張

6 顯色劑B 液3ml×1/瓶12 密封袋1 個

標本要求:

1.不能檢測含NaN3 的樣品，因NaN3 抑制辣根過氧化物酶的（HRP）活性。

2.標本采集后盡早進行提取，提取按相關(guān)文獻進行，提取后應(yīng)盡快進行實驗。若不能馬上進行試驗，可將標本放于-20℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融

操作步驟:

1.標準品的稀釋：本試劑盒提供原倍標準品一支，用戶可按照下列圖表在小試管中進行稀釋。

400pg/ml 5 號標準品150μl 的原倍標準品加入150μl 標準品稀釋液

200pg/ml 4 號標準品150μl 的5 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

100pg/ml 3 號標準品150μl 的4 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

50pg/ml 2 號標準品150μl 的3 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

25pg/ml 1 號標準品150μl 的2 號標準品加入150μl 標準品稀釋液

2.加樣：分別設(shè)空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑，其余各步操作相同）、標準孔、待測樣品孔。在酶標包被板上標準品準確加樣50μl，待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl，然后再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍）。加樣將樣品加于酶標板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動混勻。

3.溫育：用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。

4.配液：將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用

5.洗滌：小心揭掉封板膜，棄去液體，甩干，每孔加滿洗滌液，靜置30秒后棄去，如此重復(fù)5次，拍干。

6.加酶：每孔加入酶標試劑50μl，空白孔除外。

7.溫育：操作同3。

8.洗滌：操作同5。

9.顯色：每孔先加入顯色劑A50μl，再加入顯色劑B50μl，輕輕震蕩混勻，37℃避光顯色15分鐘.

10.終止：每孔加終止液50μl，終止反應(yīng)（此時藍色立轉(zhuǎn)黃色）。

11.測定：以空白空調(diào)零，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值）。測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。

計算:以標準物的濃度為橫坐標，OD值為縱坐標，在坐標紙上繪出標準曲線，根據(jù)樣品的OD值由標準曲線查出相應(yīng)的濃度；再乘以稀釋倍數(shù)；或用標準物的濃度與OD值計算出標準曲線的直線回歸方程式，將樣品的OD值代入方程式，計算出樣品濃度，再乘以稀釋倍數(shù)，即為樣品的實際濃度。

注意事項

1.試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用，酶標包被板開封后如未用完，板條應(yīng)裝入密封袋中保存。

2.濃洗滌液可能會有結(jié)晶析出，稀釋時可在水浴中加溫助溶，洗滌時不影響結(jié)果。

3.各步加樣均應(yīng)使用加樣器，并經(jīng)常校對其準確性，以避免試驗誤差。一次加樣時間控制在5分鐘內(nèi)，如標本數(shù)量多，使用排槍加樣。

4.請每次測定的同時做標準曲線，做復(fù)孔。如標本中待測物質(zhì)含量過高（樣本OD值大于標準品孔*孔的OD值），請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)（n倍）后再測定，計算時請zui后乘以總稀釋倍數(shù)（×n×5）。

5.封板膜只限一次性使用，以避免交叉污染。

6.底物請避光保存。

7.嚴格按照說明書的操作進行，試驗結(jié)果判定必須以酶標儀讀數(shù)為準.

8.所有樣品，洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。

9.本試劑不同批號組分不得混用。

10.如與英文說明書有異，以英文說明書為準。

保存條件及有效期:

1.試劑盒保存：2-8℃。

2.有效期：6個月