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柱層析分離實(shí)驗(yàn)操作步驟

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1.確定干燥、不含溶劑的待分離粗產(chǎn)品的重量。

2.用薄層色譜(TLC)選取溶劑體系,使Rf的值處于0.2~0.3之間。

3.確定用于樣品上柱的方法??捎腥N選擇:凈試樣法,溶液法(濕法)或硅膠吸附法(干法);對于液體和固體,較為普遍的方法是溶液法(濕法)上樣,即將樣品溶于溶劑中,然后將溶液加入分離柱。

4.確定合適的硅膠和化合物的比例。對于簡單的分離,通常要求兩者的比例為30~50:1(重量比);但對比較困難的分離,需要的比例高達(dá)120:1。

5.選取合適的分離柱——硅膠量決定了分離柱的尺寸,一般選用短而粗的加壓柱。

6.選取合適的收集用容器——將硅膠體積除以4,然后選取能裝下這個(gè)體積的容器就可(20L的硅膠對應(yīng)于5 L的組分)。

7.裝柱。戴好活性炭口罩,在(落地)通風(fēng)櫥中裝好分離柱,干法和濕法裝柱均可,只要能把柱子裝實(shí)就行。裝完的柱子應(yīng)該要適度的緊密(太密了淋洗劑走的太慢),一定要均勻(不然樣品就會從一側(cè)斜著下來)。

8.加樣。用少量的溶劑溶解待分離粗品,加樣,加完后將下面的活塞打開,待溶劑層下降至石英砂面時(shí),加入淋洗劑,一開始不要加壓,等溶樣品的溶劑和樣品層有一段距離(2~4cm),再加壓,這樣避免了溶劑(如二氯甲烷等)夾帶樣品快速下行。

9.樣品的收集。一邊收集樣品,一邊進(jìn)行色譜分析(TLC、LC-MS或HPLC)跟蹤柱子的分離進(jìn)程。

10.將所需純度的流出組分合并后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行濃縮。

11.當(dāng)*除去溶劑后,進(jìn)行分析(LC-MS、HPLC、或NMR等),稱重。

12.按相關(guān)規(guī)程進(jìn)行清場處理。

原文地址:/biotech/exp/bioexp/2011/g820591350

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