1、直接法免疫血清的制備

取體重2～3Kg的雄雞1只，免疫前采血8～10mL，測其正?？贵w。靜脈注射新城疫弱毒新鮮尿囊液病毒2mL，同時腹腔注射8mL，2～4d后同法再免疫一次。第二次免疫后七天試血，血清凝集價在1︰320以上為合格即可全采血；如果不合格，可在第二次免疫后10d左右，用同法再免疫一次，一般都可獲得價的免疫血清。制備抗病血血清時?？乖恳?，間隔日期要短。

2、免疫球蛋白抗血清制備方法
此法用于制備間接法抗抗體。因抗原為可溶性，故多需加佐劑。

（1）淋巴結(jié)注射法

1）選擇體重2～3Kg的健康雄性家兔（ 2只以上），編號；

2）在家兔兩后腳掌共注射活卡介苗，50mg（約0.6mL．每只足庶部皮下0.1mL，皮內(nèi)0.2mL）。7～10d后，鼠或國窩處淋巴結(jié)腫大如黃豆或蠶豆大?。?/p>

3）用二指固定腫大之淋巴結(jié)，兩側(cè)淋巴結(jié)各注射加有*佐劑的抗原o．5mL，共1mL。事先將抗原稀釋為 5～10mg/ml，在免疫前一日加入青、*，使青、*的濃度分別為1000U/mL和1000mg／mL。4℃過夜，次日取出與佐劑混合成乳劑。許多單位用兩個注射器分別吸取佐劑與抗原，中間用細膠管連接，相互推進若干次，達到乳化目的；

4）10～14d后，于兩側(cè)淋巴結(jié)各注射加有*佐劑的抗原0.25～0.5mL（這一次也可以省略）；

5）7d后，于兩側(cè)淋巴結(jié)各注射加有不*佐劑的抗原0.25～0.5mL；

6）試血：第三次免疫后7～10d，耳靜脈取少量血，分離血清，用雙擴散法，中間孔加抗原（1mg/mL），周圍孔加不同稀釋度的待檢抗血清，37℃、 24h，觀察結(jié)果，效價在1︰16以上，或者中間孔加抗血清，周圍孔加不同稀釋倍數(shù)的抗原。效價達4000倍以上即可應(yīng)用；

7）放血：效價合格后即可放血。放血前停食12h。動物仰臥固定，頸部剪毛消毒，切開皮膚lOcm，找到頸動脈，將頸動脈和迷走神經(jīng)剝離。選擇血管中段，用兩*夾住（約 5cm），切開，放血（2500g重家兔可放血lOOmL）；
8）分離血清：血液放于大試管、平皿或三角瓶中，凝固后，用鉑耳或無菌滴管沿邊緣剝離，先故37122h，再放4℃過夜，使血清充分析出。離心沉淀，鑒定合格，冰箱保存?zhèn)溆谩?/p>

（2）皮下多點注射法

1）家兔兩側(cè)腳掌，各注加有*佐劑的抗原0.5mL，共1mL；

2）7～10d后，脊柱兩側(cè)多點注射（頸椎附近二點，胸椎腰椎兩側(cè)四點，共六點），每點0.5mL；

3）7～10d 后再注一次加有不*佐劑的抗原，每點0.5mL；

4）7～10d后試血，合格者放血；不合格，每周用加不*佐劑的抗原加強免疫一次，共兩周，再試血。

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