ELISA試劑盒的操作原理：ELISA是以免疫學(xué)反應(yīng)為基礎(chǔ)，將抗原的特異性反應(yīng)與酶對底物的催化作用相結(jié)合起來的一種敏感性很高的試驗(yàn)技術(shù)。

ELISA的操作步驟：樣品收集保存、試劑準(zhǔn)備、溫育、洗板、顯色、比色、包被、加樣、加酶標(biāo)抗體、終止反應(yīng)、結(jié)果判定、 影響因素：

分子量、穩(wěn)定性、純化、包被濃度，抗體純度和產(chǎn)品質(zhì)量盡管ELISA測定的操作步驟非常簡單，但有可能會(huì)影響測定結(jié)果的因素卻較多，分布在測定操作的各步之中，尤以加樣、溫育和洗板為甚。為幫助大家分析查找測定中出現(xiàn)問題的可能原因，特對常見問題及原因歸納總結(jié)于下表。

臨床ELISA測定中可能會(huì)出現(xiàn)的問題及可能的原因問題可能的原因（非試劑盒本身的原因）

1．弱陽性質(zhì)控樣本檢測不出溫育的時(shí)間或溫度不夠；顯色反應(yīng)時(shí)間太短；所用配制緩沖液的蒸餾水有問題

2．測定的重復(fù)性差（相同樣本兩次測定結(jié)果不一致）這是典型的由測定操作引起的問題，包括（1）加樣本及試劑量不準(zhǔn)；孔間不一致；（2）加樣過快，孔間發(fā)生污染；（3）加錯(cuò)樣本；（4）加樣本及試劑時(shí)，加在孔壁上部非包被區(qū)；（5）不同批號試劑盒中組分混用；（6）溫育時(shí)間、洗板、顯色時(shí)間不一致；（7）孔內(nèi)污染雜物；（8）酶標(biāo)儀濾光片不正確；（9）血清標(biāo)本未*凝固即加入，反應(yīng)孔內(nèi)出現(xiàn)纖維蛋白凝固或殘留血細(xì)胞，易出現(xiàn)假陽性反應(yīng)等。

3．白板（陽性對照不顯色）（1）漏加酶結(jié)合物；（2）洗板液配制中出現(xiàn)問題，如量筒不干凈，含酶抑制物（如疊氮鈉）等。（3）漏加顯色劑A或B；（4）終止劑當(dāng)顯色劑使用。

4．全部板孔均有顯色（1）洗板不干凈；（2）顯色液變質(zhì)；（3）加底物的吸光受酶污染；（4）洗板液受酶等污染。 關(guān)鍵參數(shù)和功能幅度，相應(yīng)的性價(jià)關(guān)系

對于食品檢測ELISA試劑盒來說，國產(chǎn)的試劑盒在中國市場上比進(jìn)口的試劑盒占的份額要大，進(jìn)口的食品檢測ELISA試劑盒主要是在通用性試劑盒上面，國產(chǎn)的PCR試劑盒是在檢測各種天然毒素上面。

一般性食品檢測ELISA試劑盒的操作比較簡單，不需要生產(chǎn)商去上門指導(dǎo)，而且實(shí)驗(yàn)的成功率也大。食品檢測ELISA試劑盒試劑已經(jīng)成熟，穩(wěn)定性好，在食品領(lǐng)域中的應(yīng)用還在擴(kuò)大；一般在試劑盒出現(xiàn)問題的試劑，只要提供實(shí)驗(yàn)報(bào)告和以及殘留試劑，經(jīng)廠家鑒定確實(shí)屬于試劑本身問題的，可以提供退換貨服務(wù)。

酶免試劑盒要低溫運(yùn)輸，（2-8攝氏度），長期保存要在-20攝氏度分裝保存（防止反復(fù)凍融影響酶的活性），長期保存做好在2-8攝氏度 。