通用型低密度脂蛋白膽固醇（LDL-Cholesterol）均相法酶連續(xù)循環(huán)比色法

定量檢測(cè)試劑盒產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)

主要用途

通用型低密度脂蛋白膽固醇（LDL-Cholesterol）均相法酶連續(xù)循環(huán)比色法定量檢測(cè)試劑是一種旨在使用特定活性劑的情況下，通過(guò)膽固醇酯酶、膽固醇氧化酶和過(guò)氧化酶的酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)中產(chǎn)生的過(guò)氧化氫（H2O2），與氨基安替比林反應(yīng)，生成粉紅色的醌亞胺后吸光峰值的變化，即采用比色法來(lái)測(cè)定樣品中低密度脂蛋白膽固醇濃度的而經(jīng)典的技術(shù)方法。該技術(shù)經(jīng)過(guò)精心改良第三代均相（homogenous）直接檢測(cè)技術(shù)、成功實(shí)驗(yàn)證明的。其適用于各種細(xì)胞、組織、血液、體液（動(dòng)物、人體等）樣品中低密度脂蛋白膽固醇的濃度檢測(cè)。產(chǎn)品嚴(yán)格無(wú)菌，即到即用，操作簡(jiǎn)捷，性能穩(wěn)定，檢測(cè)敏感。

技術(shù)背景

膽固醇（cholesterol）是一類稱之為固醇類（sterols）或聚類異戊二烯（polyisoprenoid）或三萜皂甙元（triterpene）的多環(huán)化合物（polycyclic compound）。其分子式為cholest-5-en-3β-ol。膽固醇以游離（free form）和酯化結(jié)合（ester）兩種形式廣泛存在于所有動(dòng)物體內(nèi)，主要以游離形式循環(huán)于血液中，以脂化形式傳運(yùn)和貯存。其中脂蛋白在體內(nèi)血循環(huán)系統(tǒng)起著攜帶、轉(zhuǎn)運(yùn)和儲(chǔ)存膽固醇的重要功能。根據(jù)與不同脂蛋白的結(jié)合，定義膽固醇為好（good）和壞（bad）膽固醇。脂蛋白分成五種類型：乳糜粒脂蛋白（Chylomicrons）、極低密度脂蛋白（very low density lipoprotein；VLDL）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein；LDL）、中介密度脂蛋白（intermediate density lipoprotein；IDL）、和高密度脂蛋白（high density lipoprotein；HDL）。其中低密度脂蛋白由異源性和多分散性（polydisperse）顆粒組成，水化比重為1.006至1.063，是體內(nèi)含量zui多的膽固醇脂蛋白組分，主要功能在于在血液循環(huán)中轉(zhuǎn)運(yùn)70%脂類物質(zhì)（例如甘油三酯），或從周邊細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)膽固醇到肝臟。一旦含量增加，其患有動(dòng)脈粥樣硬化、冠狀動(dòng)脈疾病的風(fēng)險(xiǎn)增加，并可以用于預(yù)測(cè)心臟疾病的發(fā)生。基于干擾性乳糜粒脂蛋白、極低密度脂蛋白、高密度脂蛋白酯化膽固醇（cholesterel ester）等受到特定表面活性劑Emulgen溶解，由膽固醇酯酶（cholesterol esterase）水解，轉(zhuǎn)化為游離膽固醇，進(jìn)一步由膽固醇氧化酶（cholesterol oxidase）氧化產(chǎn)生過(guò)氧化氫（H2O2），zui后在過(guò)氧化氫酶（catalase）的催化下，得到去除（步驟一）。進(jìn)而剩下的完整低密度脂蛋白膽固醇經(jīng)過(guò)特定去垢劑處理釋放，繼續(xù)與膽固醇酯酶和膽固醇氧化酶反應(yīng)，在過(guò)氧化酶（peroxidase）的催化下，過(guò)氧化氫與氨基安替比林（4-amino-antipyrine；AAP）反應(yīng)，生成粉紅色的醌亞胺（quinoneimine）后吸光峰值的變化（波長(zhǎng)500nm），來(lái)定量測(cè)定低密度脂蛋白膽固醇的濃度（步驟二）。其酶連續(xù)反應(yīng)系統(tǒng)為：

步驟一

步驟二

產(chǎn)品內(nèi)容

緩沖液（Reagent A）  毫升

反應(yīng)液A（Reagent B）       毫升

反應(yīng)液B（Reagent C）       毫升

標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）       微升

產(chǎn)品說(shuō)明書(shū)   1份

保存方式

保存在－20℃冰箱里，反應(yīng)液B（Reagent C）和標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）避免光照，有效保證6月

用戶自備

恒溫水槽或培養(yǎng)箱：用于孵育反應(yīng)

200微升1厘米光徑比色皿或96孔板：用于反應(yīng)和比色分析的容器

分光光度儀或酶標(biāo)儀：用于比色分析

實(shí)驗(yàn)步驟

實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，將－20℃冰箱里的試劑置入冰槽里融化。然后進(jìn)行下列操作。

• 測(cè)定準(zhǔn)備

• 準(zhǔn)備好待測(cè)樣品，置于冰槽里備用
• 設(shè)定好酶標(biāo)儀（溫度為37℃）：波長(zhǎng)500nm
• 準(zhǔn)備好5個(gè)1.5毫升離心管，標(biāo)記為1至5號(hào)管

二、標(biāo)準(zhǔn)樣品測(cè)定

• 在96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記
• 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應(yīng)孔里
• 加入xx微升標(biāo)準(zhǔn)液（Reagent D）
• 加入xx微升反應(yīng)液B（Reagent C） 
• 輕輕搖動(dòng)96孔板30秒
• 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè)：獲得初始吸光讀數(shù)（OD）
• 在37℃溫度下孵育2.5分鐘，避免光照
• 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè)：獲得終點(diǎn)吸光讀數(shù)（OD）
• 獲得實(shí)際吸光讀數(shù)：終點(diǎn)吸光讀數(shù)（OD）－初始吸光讀數(shù)（OD）

三、樣品測(cè)定

• 在96孔板上做好相應(yīng)標(biāo)記：待測(cè)樣品
• 移取xx微升緩沖液（Reagent A）到相應(yīng)孔里
• 加入5微升待測(cè)樣品
• 加入xx微升反應(yīng)液A（Reagent B）
• 在37℃溫度下孵育5分鐘
• 加入xx微升反應(yīng)液B（Reagent C） 
• 輕輕搖動(dòng)96孔板30秒
• 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè)：獲得初始吸光讀數(shù)（OD）
• 在37℃溫度下孵育2.5分鐘，避免光照
• 即刻放進(jìn)酶標(biāo)儀檢測(cè)：獲得終點(diǎn)吸光讀數(shù)（OD）
• 獲得實(shí)際吸光讀數(shù)：終點(diǎn)吸光讀數(shù)（OD）－初始吸光讀數(shù)（OD）
• 計(jì)算樣品濃度（毫克/分升）

• 濃度換算方法：

注意事項(xiàng)

• 本產(chǎn)品為20次操作，包括標(biāo)準(zhǔn)液
• 本產(chǎn)品的檢測(cè)范圍為1至400毫克/分升
• 本產(chǎn)品適宜于各種自動(dòng)生化儀檢測(cè)
• 操作時(shí)，須戴手套
• 建議樣品保存在－70℃冰箱里，如果保存在4℃冰箱里，其穩(wěn)定性保持1周，－20℃保持3月
• 系統(tǒng)操作過(guò)程中，標(biāo)準(zhǔn)液測(cè)定只需1次
• 孵育反應(yīng)完成后即刻進(jìn)行比色測(cè)定
• 樣品比色檢測(cè)可以使用分光光度儀和比色皿替代
• 比色測(cè)定后，使用比色皿的，須清洗*
• 如果用戶沒(méi)有匹配的濾波器，可以使用480nm至520nm之間的任一波長(zhǎng)
• 如果待測(cè)樣品濃度過(guò)高或過(guò)低，可以調(diào)整樣品濃度
• 膽紅素（大于40毫克/分升）血紅蛋白（大于500毫克/分升）、甘油三酯（大于1000毫克/分升）、抗壞血酸（大于50毫克/分升）等會(huì)干擾檢測(cè)
• 正常血清低密度脂蛋白膽固醇的含量為小于或等于130毫克/分升（3.367毫摩爾）；高于160毫克/分升（4.144毫摩爾)則具有心血管疾病的風(fēng)險(xiǎn)
• 本公司提供系列脂蛋白膽固醇檢測(cè)試劑產(chǎn)品

質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)

• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定性能穩(wěn)定
• 本產(chǎn)品經(jīng)鑒定檢測(cè)敏感