elisa實(shí)驗(yàn)中的封閉液小知識

ELISA的試劑盒說明上寫封閉液用蔗糖溶液，一般是用BSA或酪蛋白的蛋白分子封閉空白位點(diǎn)，蔗糖封閉的原理：

1、ELISA實(shí)驗(yàn)中，蔗糖本身沒有封閉作用;

2、封閉液一般是BSA、酪蛋白等或者是Tween等。

3、加蔗糖的主要目的是保護(hù)ELISA板子吸附(包被)的蛋白，起到“保護(hù)劑”的作用。

4、蔗糖溶液一般在ELISA板子經(jīng)過BSA封閉后加，當(dāng)然也有將蔗糖加到封閉液中同時進(jìn)行處理;那一種更好需要你實(shí)驗(yàn)后來驗(yàn)證。但多數(shù)選擇前者。

封閉劑還可用5%的脫脂乳(市售即可)，0.4%的明膠，但是實(shí)驗(yàn)表明前者比較好，后者不容易洗干凈未結(jié)合上的明膠。

封閉劑的原理就是與酶聯(lián)板上未結(jié)合抗原或抗體的微孔中用封閉劑封閉上，結(jié)合抗體或抗原的時候就不會產(chǎn)生非特異結(jié)合了，不會影響實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確度。

tween的作用：雖然不能單獨(dú)封閉，但和BSA在封閉時會起到清洗非特異性結(jié)合或結(jié)合不牢固的蛋白的作用，假如抗體包被在板上會出現(xiàn)YY-

附件：ELISA實(shí)驗(yàn)中緩沖溶液等試劑的配置

ELISA實(shí)驗(yàn)中是以抗原和抗體的免疫反應(yīng)為基礎(chǔ)，ELISA試劑以及各種溶液如何配置?zui近剛做了下ELISA實(shí)驗(yàn)，把各種ELISA配置方法總?cè)缦拢?1) ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(3) ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液;(4)ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(5)ELISA底物緩沖液(6)ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液(7) ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液(8)ELISC。

試劑

(1) ELISA實(shí)驗(yàn)包被緩沖液(PH9.6 0.05M碳酸鹽緩沖液):

NaHCO3 1.59克

NaHCO3 2.93克

加蒸餾水至1000ml

(2) ELISA實(shí)驗(yàn)洗滌緩沖液(PH7.4 PBS)：0.15M

KH2PO4 0.2克

Na2HPO4·12H2O 2.9克

NaCl 8.0克

KCl 0.2克

Tween-20 0.05% 0.5ml

加蒸餾水至1000ml

(3) ELISA實(shí)驗(yàn)稀釋液：

牛血清白蛋白(BSA) 0.1克

加洗滌緩沖液至100ml

或以羊血清、兔血清等血清與洗滌液配成5～10%使用。

(4) ELISA實(shí)驗(yàn)終止液(2M H2SO4)：

蒸餾水178.3ml，逐滴加入濃硫酸(98%)21.7ml。

(5) ELISA底物緩沖液(PH5.0磷酸棗檸檬酸):

0.2M Na2HPO4(28.4克/L) 25.7ml

0.1M 檸檬酸(19.2克/L) 24.3ml

加蒸餾水50ml。

(6) ELISA實(shí)驗(yàn)TMB(四甲基聯(lián)苯胺)使用液:

TMB(10mg/5ml無水乙醇) 0.5ml

底物緩沖液(PH5.5) 10ml

0.75%H2O2 32μl

(7) ELISA實(shí)驗(yàn)ABTS使用液:

ABTS 0.5mg

底物緩沖液(PH5.5) 1ml

3%H2O2 2μl

(8)ELISA實(shí)驗(yàn)封閉液：

牛血清白蛋白(BSA) 5克

加洗滌緩沖液至100ml。

值得一提的是有的封閉液中含有脫脂奶粉，不適合長期保存。

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為了保證ELISA實(shí)驗(yàn)的準(zhǔn)確性，實(shí)驗(yàn)操作中加入的緩沖液和各組分一定要，將洗滌液加入酶標(biāo)板中的時候防止加入的試劑混入另外一個酶標(biāo)孔，嚴(yán)防交叉污染。

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