制備免疫血清的傳統(tǒng)方法是將抗原注入動(dòng)物體內(nèi)，由動(dòng)物體內(nèi) B 細(xì)胞增殖分化成漿細(xì)胞產(chǎn)生抗體。由于抗原分子（*抗原）具有多種抗原決定簇，每一種抗原決定簇可以激活具有相應(yīng)抗原受體的 B 細(xì)胞系產(chǎn)生該決定簇的抗體，因此用抗原免疫機(jī)體獲得的免疫血清一般均為多克隆抗體。
制備的免疫血清的質(zhì)量（特異性、親和力及效價(jià)高低）受多種因素的影響，只要包括抗原的性質(zhì)、免疫動(dòng)物的種類及狀態(tài)、免疫劑量、免疫途徑及免疫方案（加強(qiáng)免疫次數(shù)，間隔時(shí)間，佐劑的使用等）等。因此要獲得高質(zhì)量的免疫血清需先通過預(yù)實(shí)驗(yàn)摸索確定佳免疫方法。
測定免疫血清中抗體效價(jià)的方法很多，如凝集實(shí)驗(yàn)，沉淀實(shí)驗(yàn)、溶血實(shí)驗(yàn)， ELISA 等均可用于對(duì)抗體效價(jià)的測定，本次實(shí)驗(yàn)將采用溶血實(shí)驗(yàn)測定所獲得的免疫血清的效價(jià)。
一、免疫血清（漿）的制備
我們要制備的是抗綿羊紅細(xì)胞 (SRBC) 的免疫血清，即溶血素。
實(shí)驗(yàn)材料
1. 20% SRBC
2. 小白鼠
3. 無菌 1ml 注射器
4. 抗凝劑 （枸櫞酸鈉或肝素）
5. 小試管
實(shí)驗(yàn)步驟
1. 免疫動(dòng)物：初次免疫小鼠為腹腔注射20%SRBC0.2ml,4天后以相同劑量、相同途徑加強(qiáng)免疫一次。
2. 獲得免疫血清（漿）：小鼠初次免疫7天后,摘眼球取血,收入加有抗凝劑的小試管中,2000轉(zhuǎn)/分離心1分鐘,上清即為免疫血漿。
二、免疫血清（漿）的效價(jià)測定—溶血法
實(shí)驗(yàn)原理
該方法的基本原理是根據(jù)補(bǔ)體的經(jīng)典激活途徑，即當(dāng)抗原抗體復(fù)合物存在時(shí)，補(bǔ)體系統(tǒng)被激活，zui后形成的攻復(fù)合體可使細(xì)胞性抗原溶解。當(dāng)實(shí)驗(yàn)中抗原和補(bǔ)體的量固定不變，且對(duì)于抗體相對(duì)過量時(shí)，則隨著抗體量的不同，被溶解的細(xì)胞性抗原的量也不同，兩者成正比關(guān)系，因此根據(jù)溶解的抗原的多少就可以判斷出抗體的量。
實(shí)驗(yàn)材料
1. 待測免疫血清（漿）
2. 20%SRBC
3. 補(bǔ)體
4. 生里鹽水
5. 試管
實(shí)驗(yàn)方法
1. 將前面獲得的小鼠抗 SRBC 免疫血漿首先稀釋 10 倍，成為 1:10 免疫血漿。
2. 取3個(gè)試管,分別編號(hào)為A、B、C,用于對(duì)1:10免疫血漿的3倍、4倍和5倍稀釋，即A號(hào)管內(nèi)為1:30的免疫血漿;B號(hào)管為1:40 的免疫血漿；C號(hào)管為1:50的免疫血漿。
3. 取 15 支試管，分為A、B、C三列，每列5只，先給每管中加入生離鹽水0.5ml,再從A、B、C號(hào)管中分別吸取0.5ml血漿加入相應(yīng)各列的*個(gè)管中,然后各列再進(jìn)行倍比稀釋,血清稀釋度如下表：
管號(hào)    1    2    3    4    5
A 列    1:60    1:120    1:240    1:480    1:960
B 列    1:80    1:160    1:320    1:640    1:1280
C 列    1:100    1:200    1:400    1:800    1:1600
注意每列的zui后一管應(yīng)該棄去0.5ml液體。
4. 向每個(gè)試管中分別加入SRBC0.25ml和補(bǔ)體0.25ml 。
5. 混均各管中的液體,置37°C水浴30~40分鐘。
結(jié)果判定
以發(fā)生*溶血的zui高血清稀釋度管為效價(jià)判定管，其血清稀釋度即為免疫血清的效價(jià)。
注意事項(xiàng)
1. 動(dòng)物免疫時(shí)注意確保SRBC被注射到了腹腔中,要避免注入其他臟器（如腸、膀胱）內(nèi)。
2. 稀釋血清時(shí)盡量做到，注意用于不同列的吸管不要混用。

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